[發(fā)明專(zhuān)利]甘肅隴南大紅袍花椒提取物組分及其制備方法與檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610847879.2
• 申請(qǐng)日: 2016-09-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106309671B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-07-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李越峰;嚴(yán)興科;吳平安;杜麗東;劉安國(guó);金輝;曹瑞;牛江濤;邊甜甜;司昕蕾
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 甘肅中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A61K36/758
• 分類(lèi)號(hào): A61K36/758;A61P23/00;A61P29/00;A61P19/02;A61P9/00;A61P35/00;G01N30/02
• 代理公司: 北京高航知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11530
• 代理人: 趙永強(qiáng)

1.一種具有麻醉作用的甘肅隴南花椒提取物，其特征在于，該花椒提取物是采用如下方法制備的：

（1）將花椒粉碎，置烘箱內(nèi)40℃～50℃烘干3h～5h后，加15～25倍量50%～60%丙酮水溶液，于60℃～70℃水浴回流提取2次～4次，每次70min～80min，合并提取液，回收丙酮，得到花椒總提取物浸膏；

（2）將得到的花椒總提取物浸膏以氯仿:甲醇=50:5的混合溶液在40℃～50℃水浴條件下攪拌溶解，過(guò)濾，濾液在40℃～50℃水浴中減壓濃縮后進(jìn)行柱層析分離；

（3）選用D101B型大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行柱層析分離，樹(shù)脂柱徑高比為1:7～9，上樣體積6BV～8BV，水洗4BV～6BV除雜，以乙酸乙酯:0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液=100:5的洗脫劑7BV～9BV洗脫，流速為2BV/h～4BV/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，干燥，即得；

采用高效液相色譜法對(duì)該花椒提取物中的單葉蕓香品堿進(jìn)行含量測(cè)定，測(cè)定方法為：

（1）色譜條件：采用HypersilDs色譜柱；流動(dòng)相：比例為30：70的乙腈-水；檢測(cè)波長(zhǎng)：200nm；柱溫：20℃；流速：1.0mL·min^-1；進(jìn)樣量：10μL；

（2）對(duì)照品溶液制備：精密稱(chēng)取80℃干燥至恒重的單葉蕓香品堿對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的對(duì)照品溶液；

（3）供試品溶液的制備：精密稱(chēng)取花椒提取物10mL，加甲醇40mL，加熱回流4h，提取液回流溶劑并濃縮至干，殘?jiān)铀?0mL溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取濾液，即得供試品溶液；

（4）測(cè)定：分別精密量取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，進(jìn)行檢測(cè)；

采用氣相色譜法對(duì)該花椒提取物中的香檜烯、葎草烯進(jìn)行含量測(cè)定，測(cè)定方法為：

（1）色譜條件：色譜柱：ZB-WAX彈性石英毛細(xì)管柱；載氣：N₂，1.0mL·min^-1；氫氣，40mL·min^-1；空氣，400mL·min^-1；分流比：8：1；進(jìn)樣口溫度：250℃，檢測(cè)器溫度300℃；程序升溫：初始80℃，每分鐘5℃升至120℃，每分鐘10℃升至180℃，保持3.5min；內(nèi)標(biāo)法；

（2）內(nèi)標(biāo)溶液的制備：取環(huán)己酮適量，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋制成每1mL含12.5mg的溶液，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)溶液；

（3）供試品溶液的制備：精密量取花椒提取物1.0g，置10mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1.0mL，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻；

（4）對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取香檜烯對(duì)照品、葎草烯對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋制成含香檜烯0.301mg·mL^-1及葎草烯0.901mg·mL^-1的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，備用；

（5）測(cè)定：分別精密量取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液各10μL，注入氣相色譜儀，進(jìn)行檢測(cè)。

2.如權(quán)利要求1所述的花椒提取物，其特征在于，該花椒提取物是采用如下方法制備的：

（1）將花椒粉碎，置烘箱內(nèi)40℃烘干5h后，加15倍量55%丙酮水溶液，于60℃水浴回流提取4次，每次70min，合并提取液，回收丙酮，得到花椒總提取物浸膏；

（2）將得到的花椒總提取物浸膏以氯仿:甲醇=50:5的混合溶液在50℃水浴條件下攪拌溶解，過(guò)濾，濾液在50℃水浴中減壓濃縮后進(jìn)行柱層析分離；

（3）選用D101B型大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行柱層析分離，樹(shù)脂柱徑高比為1:7，上樣體積8BV，水洗4BV除雜，以乙酸乙酯:0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液=100:5的洗脫劑9BV洗脫，流速為2BV/h，收集洗脫液，洗脫液濃縮，干燥，即得；

3.如權(quán)利要求1～2任意一項(xiàng)所述的花椒提取物，其特征在于，該花椒提取物采用藥學(xué)中常規(guī)的制藥方法制備成外用藥物制劑或氣霧劑。