[發明專利]一種纖維結合蛋白檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201610845853.4
• 申請日: 2016-09-24
• 公開（公告）號: CN106645694A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 李敏;王進;譚柏清;王美麗
• 申請（專利權）人: 濟南博鑫生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/536
• 分類號: G01N33/536;G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及臨床體外檢測技術領域，特別涉及一種纖維結合蛋白免疫比濁法檢測試劑盒。

背景技術

纖維結合蛋白（Fibronectin, Fn ）是一組廣泛分布于血漿和多種細胞表面的 高分子糖蛋白，具有調節巨噬細胞、嗜中性粒細胞趨化、促進細胞之間及其與基質之間的粘附等生理作用，它們與多種疾病的發生、發展有密切關系。

纖維結合蛋白是由兩個幾乎相同的亞單位以二硫鍵連接而成的具有非免疫性調理素作用且具有多種生物活性的一種高分子糖蛋白。血漿纖維結合蛋白測定有助于腦血栓與腦出血的鑒別診斷，動態觀察腦血管疾病患者血漿纖維結合蛋白含量有助于檢測病情恢復和療效。肺心病患者急性期血漿纖維結合蛋白明顯下降，惡化期極度降低，緩解期逐步恢復。呼吸衰竭、肺部感染和酸堿失調者血漿纖維結合蛋白均明顯降低。早期肝硬化、爆發性肝衰竭和失代償期肝硬化血漿纖維結合蛋白則明顯降低，急性肝炎和慢性遷延性肝炎血漿纖維結合蛋白正常或偏低。尿毒癥和嚴重腎功能受損患者血漿纖維結合蛋白顯著低于慢性腎盂腎炎，也顯著低于腎功能尚正常的慢性腎炎。血漿纖維結合蛋白降低越明顯，尿素氮和肌酐增高越顯著，愈后越差。原發性血小板減少性紫癜病人的纖維結合蛋白增加而血小板不增加者出血也明顯減輕，說明Fn在止血過程中起重要作用。

目前，血漿纖維結合蛋白的檢測主要有乳膠凝集試驗、酶免疫分析法和單向免疫擴散法，這些方法檢測時間較長，實驗條件不易控制，精密度較低，不適合大批量標本的處理及自動化檢測。本發明提供一種用免疫透射比濁法檢測纖維結合蛋白的試劑盒，優化其反應體系，使其操作簡單、重復性好、穩定性好、可進行批量樣本全自動化檢測，從而有利于在市場中進一步推廣使用。

發明內容

本發明旨在提供一種穩定性好的用于檢測纖維結合蛋白的試劑盒，該試劑盒采用免疫透射比濁法，與常規的試劑盒相比，穩定性和線性相關性好，有利于試劑在臨床上推廣應用。

基本原理：

以免疫透射比濁法為測定原理，當樣本與試劑混合后，樣本中的纖維結合蛋白與羊抗人纖維結合蛋白抗體發生特異性結合，形成不溶性的抗原-抗體復合物，使溶液產生濁度，在340nm波長下檢測，該濁度的高低在一定量抗體存在時與抗原的含量成正比。通過與同樣處理的校準液比較，計算未知樣本中纖維結合蛋白的含量。

發明是通過以下步驟得到的：

一種纖維結合蛋白檢測試劑盒，其特征在于，它包含試劑R。試劑組成如下：20mmol/L pH為7.8 的磷酸鹽緩沖液、2mg/mL羊抗人纖維結合蛋白抗體、2%聚乙二醇6000、2%乳膠顆粒、10mmol/L EDTA-Na₂、50mmol/L氯化鈉、10mmol/L疊氮鈉。

所述的纖維結合蛋白檢測試劑盒，其特征在于試劑R緩沖液為25℃，pH為7.8的磷酸鹽緩沖液。

所述的纖維結合蛋白檢測試劑盒，其特征在于所述膠乳顆粒為聚苯丙烯，粒徑為80-160nm。

所述的纖維結合蛋白檢測試劑盒，其特征在于所述穩定劑為EDTA- Na₂（乙二胺四乙酸二鈉）。

所述的纖維結合蛋白檢測試劑盒檢測纖維結合蛋白的檢測方法是：使用全自動生化分析儀利用終點法進行測定，檢測主波長為340nm。

本發明的試劑盒在具有雙試劑功能的全自動生化分析儀上進行，其具體使用方法如下：

加入生理鹽水、樣本或校準品3μl，再加入300μl 的試劑R，預孵育5min后讀取吸光度A1，再反應5min后讀取吸光度A2，并計算ΔA。

本發明的有益效果：

1）采用新的緩沖體系，改善了試劑的穩定性；

2）添加EDTA-Na₂，增強了試劑穩定性，而且不會對試劑的準確度產生影響；

3）試劑準確度和穩定性好，價格便宜，使用方便，有利于該試劑在市場中進一步推廣。

附圖說明

圖1實施例1試劑與對照組試劑的相關性曲線圖；

圖2實施例1試劑與對照組試劑效期穩定性曲線圖；

圖3 實施例1試劑與對照組試劑對比檢測結果；

圖4 實施例1試劑與對照組試劑線性相關驗證實驗檢測結果；

圖5 實施例1試劑與對照組試劑穩定性驗證實驗檢測結果。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明進行進一步說明：

實施例1

一種常規的纖維結合蛋白檢測試劑盒，它包括試劑R。

試劑R組成為：

20mmol/L 磷酸鹽緩沖液pH為7.8