[發明專利]靶向間皮素的嵌合抗原受體及其用途

有效

• 申請號: 201610835658.3
• 申請日: 2016-09-20
• 公開（公告）號: CN107841506B
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 黃飛;金濤;王海鷹;何鳳;史子嘯
• 申請（專利權）人: 上海恒潤達生生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/867;C12N7/01;C12N5/10;C07K19/00;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 韋東

本發明涉及靶向間皮素的嵌合抗原受體及其用途。具體而言，本發明提供一種多核苷酸序列，選自：(1)含有依次連接的抗間皮素單鏈抗體的編碼序列、人CD8α鉸鏈區的編碼序列、人CD8跨膜區的編碼序列、人CD28胞內區的編碼序列、人41BB胞內區的編碼序列、人CD3ζ胞內區的編碼序列和任選的EGFR的含胞外結構域III和胞外結構域IV的片段的編碼序列的多核苷酸序列；和(2)(1)所述多核苷酸序列的互補序列。本發明還提供相關的融合蛋白、含所述編碼序列的載體，以及所述融合蛋白、編碼序列、載體的用途。

技術領域

本發明屬于嵌合抗原受體領域，具體涉及靶向間皮素的嵌合抗原受體及其用途。

背景技術

胰腺癌是臨床上常見的消化系統惡性腫瘤，多見于50歲以上的人群。其發病率有明顯的地區差異，近年來發病率呈逐漸上升趨勢，在歐美國家已是第4常見的惡性腫瘤，居消化道癌癥死因的第2位，僅次于大腸癌。胰腺癌發病隱匿，早期癥狀無特異性，手術切除率低。在腫瘤發生發展的進程中，很多基因的活化及其產物的表達起到了重要的作用，其內在確切的分子機制尚不完全明確，隨著現代影像及內鏡技術的飛速發展，對一些癥狀體征及影像表現較為明顯的胰腺癌，明確診斷己沒有太大困難，但此時大多己失去最佳手術時機，而對于一些早期患者診斷較難。因此尋求新的治療手段，對于胰腺癌的治療是當務之急。

在腫瘤的浸潤轉移過程的研究方面，間皮素(Mesothelin)也是當前研究的熱點。1996年Chang等利用宮頸癌HeLa細胞克隆出單克隆抗體識別的抗原，研究發現該抗原存在于正常間皮細胞，故命名為間皮素。腫瘤患者術后生存率低預后差的主要原因與它的浸潤轉移有關，腫瘤的浸潤轉移機制研究是目前的熱點和難點。間皮素基因編碼一種69kDa的前體蛋白，經加工形成一個40kDa的膜結合蛋白(即Mesothelin)和一個31kDa稱為巨核細胞促進因子MPF的脫落片斷。間皮素高表達于多種腫瘤組織中，卵巢癌患者血清中的間皮素mRNA和蛋白質水平高表達，組織切片染色顯示非粘蛋白卵巢癌中有66％呈間皮素陽性；在胸膜間皮瘤的檢測中發現，15例確診為上皮性間皮瘤的病例全都呈陽性，4例肉瘤性間皮瘤全為陰性；Argani等研究報道，切除的原發性胰腺癌中，免疫組化法檢測表明60例有54例強陽性，而周圍正常胰腺組織則無間皮素反應活性；在其他實體腫瘤分析中，宮頸、頭、頸、陰道、肺及食管的鱗癌冰凍切片中均可發現間皮素免疫活性，肺腺癌、子宮內膜癌、交界性滑膜肉瘤及結締組織增生性小圓細胞腫瘤有少量間皮素表達，在乳腺癌，甲狀腺癌、腎細胞癌、膀胱移細胞癌、黑色素癌及肝癌中僅有少許或沒有間皮素表達。

間皮素的生物學功能尚未明確。Pastan等構建了一種間皮素基因突變小鼠，這些基因突變小鼠與同胞的野生型小鼠生長和繁殖相同，并且二者的血小板計數沒有統計學差異；有研究顯示間皮素與CA 125結合能介導細胞粘附，由此研究者們也認為CA 125和間皮素在卵巢癌的轉移擴散中可能起重要作用；另外，有研究亦表明，間皮素基因的表達受到Wnt等重要信號途徑的調節，如在卵巢癌和胰腺癌中，Wnt信號轉導途徑持續激活促使間皮素表達增加。雖然間皮素的功能及其致癌作用仍有待于進一步明確，但其在正常組織中的分布有限而在某些腫瘤組織高度表達的特征，因而間皮素可作為腫瘤特異性抗體治療的靶向。

嵌合抗原受體(Chimeric Antigen Receptor-T cell，CAR-T)T細胞是指經基因修飾后，能以MHC非限制性方式識別特定目的抗原，并且持續活化擴增的T細胞。2012年國際細胞治療協會年會中指出生物免疫細胞治療已經成為手術、放療、化療外的第四種治療腫瘤的手段，并將成為未來腫瘤治療必選手段。嵌合抗原受體(CAR)是CAR-T的核心部件，賦予T細胞HLA非依賴的方式識別腫瘤抗原的能力，這使得經過CAR改造的T細胞相較于天然T細胞表面受體TCR能夠識別更廣泛的目標。CAR的基礎設計中包括一個腫瘤相關抗原(tumor-associated antigen，TAA)結合區(通常來源于單克隆抗體抗原結合區域的scFV段)，一個胞外鉸鏈區，一個跨膜區和一個胞內信號區。目標抗原的選擇對于CAR的特異性、有效性以及基因改造T細胞自身的安全性來講都是關鍵的決定因素。