[發(fā)明專利]一種花椰菜花球花梗長度的分子標記輔助選擇方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610824333.5
• 申請日: 2016-09-14
• 公開（公告）號: CN106399498B
• 公開（公告）日: 2019-10-25
• 發(fā)明（設計）人: 趙振卿;顧宏輝;盛小光;虞慧芳;王建升
• 申請（專利權）人: 浙江省農業(yè)科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務所有限公司 33214
• 代理人: 王靜

1.一種花椰菜花球花梗長度的分子標記輔助選擇方法，其特征在于該方法按如下步驟進行：

1）待檢測材料準備：將待檢測的花椰菜材料按照常規(guī)方法播種、育苗，并分單株編號；于2-3片真葉期取各單株葉片按照常規(guī)CTAB方法分別提取基因組DNA，-20℃保存，備用；

2）待檢測樣品基因組DNA的PCR擴增：利用特異引物組合對待檢測樣品的基因組DNA分別進行PCR擴增，特異引物組合中上游引物：5’- CAAATTTGTTTCGAAGTGATTCT -3’;下游引物 :5'- TGGATGGAGTTCA A ATCTTTT -3’；反應總體積20μL，具體體系如下：2.5 mmol/L上述引物，0.2 mmol/L dNTPs，1 U Taq酶，2mmol/L MgCl₂，1×擴增緩沖液，基因組DNA 50 ng，加dd H₂O至20μL；熱循環(huán)程序為：94℃預變性2 min，1個循環(huán)；94℃變性1min，55℃復性30 s，72℃延伸45 s，35個循環(huán)；72℃延伸10min；4℃保存；

3）PCR產物的酶切反應及電泳檢測：將2）中的PCR產物利用限制性內切酶Mae I在37℃條件下酶切3 h，酶切體系含 PCR 產物 7μL， 10×buffer 1μL，1 U Mae I，加dd H₂O至10μL；酶切后將其產物在1.2% 瓊脂糖凝膠上進行電泳分離，溴乙錠顯色；

4）待檢測樣品花球花梗長度的鑒定與篩選：依據3）中凝膠條帶模式，顯示為169bp的樣品視為含有長花梗位點基因型的材料予以保留，而顯示為135bp的樣品則視為不含長花梗位點基因型的材料予以剔除；將入選幼苗定植于大田，按照常規(guī)花椰菜栽培措施進行田間管理；花球成熟時用游標卡尺測量花球最下部4個不同分枝方向的花梗長度，取平均值作為該株的花梗長度值，淘汰其中花梗長度達不到預期值的短花梗植株。

2.一種檢測花椰菜花球花梗長度的特異引物組合，其特征在于該引物組合中上游引物：5’- CAAATTTGTTTCGAAGTGATTCT -3’;下游引物 :5'- TGGATGGAGTTCAAATCTTTT -3’。