[發明專利]一種免疫原HM4-M2e及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201610819062.4
• 申請日: 2016-09-13
• 公開（公告）號: CN106279379B
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 安文琪;張靜靜;馬小偉;師方園;姚偉利;梁雪爽
• 申請（專利權）人: 華蘭生物工程股份有限公司;華蘭生物疫苗有限公司;華蘭基因工程有限公司
• 主分類號: C07K14/11
• 分類號: C07K14/11;C07K19/00;A61K39/145;A61K39/385;A61P31/16
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;白艷

本發明公開了一種免疫原HM4?M2e及其制備方法與應用。本發明以乙肝病毒核心蛋白HM4為載體蛋白，通過SMCC與本發明設計合成的多肽M2e相交聯，得到免疫原HM4?M2e。通過實驗證明：將制備的免疫原HM4?M2e作為流感疫苗的有效成分，并以適宜的免疫佐劑作為輔料制成的藥物有很好的免疫效果。且本發明所使用的載體蛋白適合于大規模工業化生產的優點，同時交聯率高，制備時間短，降低了生產成本。

技術領域

本發明涉及一種免疫原HM4-M2e及其制備方法與應用，屬于生物技術領域。

背景技術

合成肽疫苗(Synthetic peptide vaccine)是用化學方法合成的病毒保護性抗原多肽疫苗，其安全性好，不會受到病原微生物的污染，且易保存和控制質量。但是合成肽疫苗一般分子量較小且只針對單一抗原位點，免疫原性較差，對序列依賴性的抗原位點免疫效果較好，對構象依賴性位點則較差。

乙肝病毒核心蛋白HBc(Hepatitis B virus core protein,HBc)由于其天然的顆粒組裝能力和特異性激發針對外源表位的體液免疫和細胞免疫的特性，成為載體蛋白研究的熱點。近年來，HBc顆粒的應用方面已經有了較成熟研究結果。乙型肝炎病毒核心抗原HBc蛋白由183-185個氨基酸殘基(各亞型之間稍有不同)組成，相對分子質量為21000Da，其C端富含精氨酸，有結合核酸RNA的能力，并與其組裝成乙肝核心顆粒有關，同時也含有多種蛋白酶作用位點，N端的1～144位氨基酸殘基是真正的顆粒裝配區。疫苗研究中以HBc作為載體的疫苗抗原有很多，如乙肝病毒表面抗原、人乳頭瘤病毒E7蛋白、B群鏈球菌CPS糖蛋白等，在臨床前實驗研究中已觀察到肯定的療效。因此，發展以HBc顆粒為載體的流感病毒表位疫苗研究具有很好的前景和應用價值。

甲型流感病毒為分節段的單股負鏈RNA病毒，基因組含8個節段，第7個節段RNA編碼M1和M2蛋白。其中M2蛋白是除HA和NA以外的第3個外膜蛋白，從N端到C端依次為：含23個氨基酸的胞外區(M2e)、含19個氨基酸的疏水性跨膜區和含54個氨基酸的胞內區。天然狀態下M2以同源四聚體的形式存在于流感病毒表面，每個病毒粒子僅含14～68個M2分子，但感染流感病毒的細胞表面分布著大量M2分子，具有質子通道的作用，在病毒侵染時能降低病毒顆粒內部的pH值，幫助病毒釋放RNA。

發明內容

本發明的第一個目的是提供一種多肽。

本發明提供的多肽是如下a)或b)或c)的蛋白質：

a)氨基酸序列是序列表中序列1所示的蛋白質；

b)在序列表中序列1所示的蛋白質的N端和/或C端連接標簽得到的融合蛋白質；

c)將序列表中序列1所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白質。

本發明的第二個目的是提供一種偶聯物。

本發明提供的偶聯物為將上述多肽與載體蛋白通過交聯劑交聯得到的物質；

所述多肽和所述載體蛋白的結合率為(1-3):1。

上述偶聯物中，所述交聯劑為SMCC；所述載體蛋白為乙肝病毒核心蛋白HM4；

所述乙肝病毒核心蛋白HM4的氨基酸是如下d)或e)或f)的蛋白質：

d)氨基酸序列是序列表中序列2所示的蛋白質；

e)在序列表中序列2所示的蛋白質的N端和/或C端連接標簽得到的融合蛋白質；

f)將序列表中序列2所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白質。

本發明的第三個目的是一種偶聯物的制備方法。