本發(fā)明公開了一種快速區(qū)分犬瘟病毒、犬細(xì)小病毒和狂犬病毒的多重?zé)晒饷庖叻治龇椒霸噭┖小１景l(fā)明操作簡單，通過PCR獲得目標(biāo)擴(kuò)增片段，然后將擴(kuò)增產(chǎn)物、熒光編碼微球和鏈霉親和素?藻紅蛋白進(jìn)行雜交，然后通過檢測儀器讀取MFI值，分辯不同類型的病原。本發(fā)明方法，能夠同時(shí)檢測鑒別犬瘟病毒、犬細(xì)小病毒和狂犬病毒，而且具有特異性強(qiáng)，靈敏度高，重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，可實(shí)現(xiàn)同一樣本中的多種不同目的分子的同時(shí)檢測。本發(fā)明靈活性好，可以根據(jù)需要在此基礎(chǔ)上加減檢測病原的種類。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于養(yǎng)犬業(yè)的病原檢測領(lǐng)域，具體涉及一種檢測犬瘟病毒、犬細(xì)小病毒和狂犬病毒的多重?zé)晒饷庖叻治龇椒ā?/p>

背景技術(shù)

犬瘟病毒（Canine distemper virus, CDV）、犬細(xì)小病毒（Canine parvovirus,CPV）、狂犬病毒（Rabies virus, RV）是犬病毒性傳染病暴發(fā)和流行的幾個(gè)重要病原體，這三種病毒單一或混合感染后臨床致死率可達(dá)50%~100%，給養(yǎng)犬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。CDV感染引起的犬瘟主要有呼吸型、消化型、神經(jīng)型和混合型4種，可引起感染動(dòng)物全身性的免疫抑制，病死率極高。單一CPV感染機(jī)體引起的癥狀較輕，與其他病毒、細(xì)菌協(xié)同混合感染，引起的臨床癥狀非常明顯，主要引起犬急性出血性胃腸炎和幼犬急性心肌炎。RV是人獸共患傳染病—狂犬病的病原體，其感染危害中樞神經(jīng)系統(tǒng)，病死率幾乎為100%，至今尚無有效的治療藥物，是迄今為止人類病死率最高的急性傳染病。

目前對CDV、CPV、RV 的臨床診斷方法主要采取血清學(xué)方法，如ELISA、膠體金快速檢測試紙條等，但是非特異性交叉反應(yīng)而影響診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性，并且該方法的敏感性不夠高。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，最近國內(nèi)外建立了PCR/多重PCR、熒光定量PCR等檢測方法。雖然PCR技術(shù)具有特異性強(qiáng)、敏感度高的優(yōu)點(diǎn)，但結(jié)果判定需要電泳，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且反應(yīng)產(chǎn)物容易產(chǎn)生污染而導(dǎo)致假陽性。熒光定量PCR技術(shù)融合了PCR的多種優(yōu)點(diǎn)，具有更高的敏感性和特異性并且大大縮短了檢測時(shí)間。建立兩重或三重?zé)晒舛縋CR方法比較復(fù)雜，除了對試劑、引物有特殊要求外，同時(shí)也要求儀器有多個(gè)檢測通道，大大增加了實(shí)驗(yàn)難度，并且仍不能滿足樣品較多但樣本量較少的檢測需求。目前，尚未見有應(yīng)用多重免疫熒光分析方法對犬瘟病毒、犬細(xì)小病毒、狂犬病毒進(jìn)行檢測的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種快速區(qū)分犬瘟病毒、犬細(xì)小病毒和狂犬病毒的多重?zé)晒饷庖叻治鲆铩?/p>

本發(fā)明的另一目的在于提供一種快速區(qū)分犬瘟病毒、犬細(xì)小病毒和狂犬病毒的多重?zé)晒饷庖叻治鲈噭┖小?/p>

本發(fā)明的再一目的在于提供一種快速區(qū)分犬瘟病毒、犬細(xì)小病毒和狂犬病毒的多重?zé)晒饷庖叻治龇椒ā?/p>

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

一種快速區(qū)分犬瘟病毒、犬細(xì)小病毒和狂犬病毒的多重?zé)晒饷庖叻治鲆铮鲆锖塑账嵝蛄腥缦滤荆?/p>

引物CDV1：AACAGATGGGTGAAACAGCA（SEQ ID NO：1），

引物CDV2：GCATAACTCCAGAGCAATGGGTAG（SEQ ID NO：2）；

引物CPV1：CAAGATAAAAGACGTGGTGTAACTC（SEQ ID NO：3），

引物CPV2：TTGTGTAGACGCCTCAAAAGAATAA（SEQ ID NO：4）；

引物RV1：CAGGACTGGTATCATTTACTGGGTT （SEQ ID NO：5），

引物RV2：GAAGTGGATGAAATAAGAGTGAGG （SEQ ID NO：6）。

進(jìn)一步的，所述引物CDV1和CDV2其中一條引物的5’端被生物素化；