[發(fā)明專利]基于近紅外熒光探針銅納米簇的葉酸檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610762476.8
• 申請日: 2016-08-29
• 公開（公告）號: CN107782704B
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李妍;李欣格;張菲
• 申請（專利權(quán)）人: 天津師范大學(xué)
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 天津創(chuàng)智天誠知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 12214
• 代理人: 王秀奎

1.基于近紅外熒光探針銅納米簇的葉酸檢測方法，其特征在于，以磷酸緩沖水溶液(PBS)、銅納米簇分散體系和待測樣品組成葉酸檢測體系，檢測加入待測樣品前后的熒光強度變化，對比標準曲線，得到待測樣品中葉酸的含量，線性方程為F₀/F＝1.0589+0.0098C，F(xiàn)₀為不加入葉酸時的熒光強度檢測值，F(xiàn)為加入葉酸后的熒光強度檢測值，C為葉酸濃度，檢出限為0.20μM，檢測范圍為0.50-200μM，磷酸緩沖水溶液3.1mL、銅納米簇分散體系0.8mL和待測樣品100μL組成葉酸檢測體系4.0mL，磷酸緩沖水溶液濃度為0.01mol/L，25℃，pH＝7.4，銅納米簇分散體系，以卵清蛋白為保護劑，水合肼為還原劑的銅納米簇，按照下述步驟進行制備：

步驟1，稱取60-160mg卵清蛋白溶解于裝有3-8mL高純水的燒杯中；

步驟2，向步驟1得到的溶液中加入0.02-0.18mL的0.1M氯化銅溶液，室溫條件下攪拌8-12min；

步驟3，向步驟2得到的溶液中加入0.1-1.5mL水合肼水溶液，其中水合肼的質(zhì)量百分數(shù)為80％后，向其中加入高純水至8-20mL,并在室溫條件下攪拌2-5h后，即得到銅納米簇分散體系。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于近紅外熒光探針銅納米簇的葉酸檢測方法，其特征在于，在進行標準曲線的檢測中，按照下述步驟進行：

步驟1，配置0.01mol/L，25℃，pH＝7.4磷酸緩沖水溶液；

步驟2，配置一系列濃度葉酸溶液

40mmol·L^-1葉酸溶液：稱取0.0883g葉酸溶于高純水中，定容5.0mL；以40mmol·L^-1葉酸溶液稀釋配制0.1mM、0.2mM、0.4mM、0.6mM、0.8mM、1.0mM、2.0mM、3.0mM、4.0mM、6.0mM、10.0mM、14.0mM、16.0mM、20.0mM、26.0mM、30.0mM、36mM、40.0mM的葉酸溶液，對應(yīng)4.0mL檢測體系葉酸濃度分別為0.5μM、1.0μM、2.0μM、3.0μM、4.0μM、5.0μM、10.0μM、15.0μM、20.0μM、30.0μM、50.0μM、70.0μM、80.0μM、100.0μM、130.0μM、150.0μM、180.0μM、200.0μM；

步驟3，移取0.01mol/L PBS溶液3.1mL，加入0.8mL銅納米簇分散體系，再加入100μL葉酸溶液，使用熒光光度計檢測葉酸檢測體系中添加葉酸前后的熒光強度，根據(jù)熒光強度相對變化建立標準曲線。