[發(fā)明專利]一種檢測牛奶中磺胺類抗生素殘留的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610750230.9
• 申請日: 2016-08-29
• 公開（公告）號: CN106198821B
• 公開（公告）日: 2017-12-05
• 發(fā)明（設計）人: 李杰
• 申請（專利權）人: 鄭州點石生物技術有限公司
• 主分類號: G01N30/74
• 分類號: G01N30/74;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙)11411
• 代理人: 張清彥

技術領域

本發(fā)明涉及抗生素殘留檢測技術領域，特別涉及一種檢測牛奶中磺胺類抗生素殘留的方法。

背景技術

牛奶中抗生素殘留問題在世界范圍內一直沒有被徹底攻克，已成為行業(yè)發(fā)展以及食品安全的隱患之一?？股刂饕改芤种苹驓⑺榔渌⑸锏囊活惢瘜W物質，如青霉素、四環(huán)素、金霉素、鏈霉素、氯霉素、磺胺類藥物等。在醫(yī)學上，抗生素被廣泛的應用于預防和治療多種微生物感染性疾病以及某些癌癥。在奶業(yè)的源頭中，抗生素使用頻率很高，特別是治療牛乳房炎，常常大劑量反復使用。據統計，約有十多種抗生素以一種或多種聯合的形式采用粉劑、涂擦劑、注射劑，以及乳導管注入等方式加以應用，導致抗生素殘留相當嚴重，在奶牛飼料中，也含有抗生素添加劑。

牛奶中不允許殘留抗生素，主要有兩個原因：第一，占人口一定比例的人對抗菌素尤其是青霉素過敏，人們長期飲用或食用抗生素殘留的牛奶或奶制品，也就相當于長期低劑量的攝取抗生素，其危害性主要有：①使人體產生耐藥性，給今后患病使用抗生素治療帶來不良影響；②抗生素對過敏體質的人會出現過敏反應，危及健康；③破壞人體內正常菌群的平衡狀態(tài)，使菌群失調，甚至造成二重感染，使重癥患者病情難以控制。

第二，發(fā)酵奶制品(酸奶和干酪)的生產依賴于乳酸菌的生長，而乳酸菌的生長受抗菌素的強烈抑制，常導致發(fā)酵失敗。

牛奶中存在的磺胺類抗生素屬于痕量物質，發(fā)達國家多采用高效液相色譜儀-質譜聯用技術進行研究，但該方法成本相對較高，目前對殘留獸用磺胺類抗生素的檢測研究多在動物性食品領域，在牛奶中的推廣使用有一定的局限性；也存在用微生物培養(yǎng)的方法檢測牛奶中磺胺類抗生素，但該方法耗時較長，靈敏度也較差。

發(fā)明內容

本發(fā)明提供了一種檢測牛奶中磺胺類抗生素殘留的方法，解決現有的方法成本相對較高、檢測耗時長的問題。

為解決上述技術問題，本發(fā)明采用的技術方案為：

一種檢測牛奶中磺胺類抗生素殘留的方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)預處理：將牛奶加入離心管中，加入酸溶液和氯化鈉，離心，離心后的上清液于雞心瓶中，旋轉蒸發(fā)至近干，加入體積比為3:1的乙腈和甲苯混合液，超聲溶解，得提取液；層析柱中加入無水硫酸鈉后，用體積比為3:1的乙腈和甲苯混合液進行活化，加入提取液，用體積比為3:1的乙腈和甲苯混合液進行淋洗，收集淋洗液于雞心瓶中備用，將雞心瓶中的淋洗液旋轉蒸發(fā)近干，加入甲醇溶解超聲后，得預處理溶液；

(2)色譜測定：測定的色譜條件為：高效液相色譜儀；反相色譜柱；流速：0.6～1.0ml/min；溫度：室溫；SPD-20A紫外檢測器，檢測波長270nm；流動相：為0.5％的乙酸溶液：乙腈：0.005～0.03mol/L的鹽溶液＝80：35：50，進樣量20μl；

(3)計算：取預處理溶液1ml置100ml容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取磺胺類抗生素對照品，同法測定，按外標法以峰面積計算，即得。

其中，優(yōu)選地，所述鹽溶液采用乙酸銨、乙酸鈉、草酸銨、草酸鈉、氯化銨、亞硫酸銨溶液中的任意一種或多種。

其中，優(yōu)選地，所述磺胺類抗生素指磺胺甲基嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺鄰二甲氧嘧啶和磺胺喹惡啉中的一種。

其中，優(yōu)選地，所述離心轉速是1000～2500r/min，離心時間為5～10min。

其中，優(yōu)選地，所述酸溶液中的酸為乙酸、磷酸、鹽酸、硫酸、硝酸或鹽酸乙醇。

其中，優(yōu)選地，所述酸溶液的體積濃度為1～20％。

本發(fā)明的有益效果：

1.本發(fā)明在牛奶進入液相檢測前進行預處理，該預處理固相萃取效果好，凈化后基線穩(wěn)定，回收率高，又可以避免其它雜質峰的干擾和重疊。

2.本發(fā)明利用磺胺類抗生素在高效液相色譜儀紫外檢測器270nm波長下檢測效果最佳，通過對流動相及各組分配比、流速、溫度等條件的優(yōu)化組合，確定目標藥物的最佳檢測條件。

3.本發(fā)明所用的樣品量及各種試劑的用量少，對環(huán)境危害小，檢測速度快，準確率高，操作簡單、耗時短。

具體實施方式

下面對本發(fā)明的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的內容僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā)明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。

實施例