[發(fā)明專利]一種針對魚中生物胺的快速分析方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610727898.1
• 申請日: 2016-08-25
• 公開（公告）號: CN107782834B
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 許國旺;傅燕青;趙春霞;路鑫;周智慧
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

本發(fā)明公開了一種針對魚中生物胺的快速分析方法。針對常見的生物胺(胍基丁胺，組胺，酪胺，精胺，亞精胺，2?苯乙胺，色胺，尸胺，腐胺等9種生物胺)，采用5?磺基水楊酸作為提取溶劑，珠打研磨作為提取方法，苯甲酰氯作為衍生試劑，采用液相色譜?三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀進行靶向分析。基于優(yōu)化得到的響應(yīng)最佳的離子對作為定量離子對，響應(yīng)次之的離子對作為輔助定性離子對，進行多反應(yīng)監(jiān)測模式的檢測。此發(fā)明大大縮短了樣品提取時間和生物胺衍生時間，從而極大地縮短了整個分析過程的分析時間。本發(fā)明分析方法具有樣品前處理簡單、衍生快速、檢測靈敏度高，重復性好等優(yōu)點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分析化學領(lǐng)域和食品安全領(lǐng)域，是一種針對魚中生物胺的快速分析方法。

背景技術(shù)

生物胺是一類含氮的低分子量有機化合物，具有生物活性。常見的生物胺主要有胍基丁胺，組胺，酪胺，精胺，亞精胺，2-苯乙胺，色胺，尸胺，腐胺。在生物體內(nèi)，微生物產(chǎn)生的脫羧酶作用于游離氨基酸引起其脫羧基反應(yīng)從而產(chǎn)生相應(yīng)生物胺。他們多存在于動植物體、發(fā)酵食品以及肉類食品中。生物胺是生物活性細胞必不可少的組成部分，具有重要的生物功能，但是攝入量過多則會引起頭疼、惡心以及過敏等不良反應(yīng)，嚴重時甚至危及生命。因此食品中生物胺含量的多少可以作為食品質(zhì)量的指示劑。基于此，建立相關(guān)食品中生物胺的快速分析方法具有重要的意義。

目前已有多種分析方法應(yīng)用于生物胺的檢測，如薄層色譜、氣相色譜、液相色譜等。其中液相色譜的應(yīng)用較為廣泛，通常與紫外檢測器，熒光檢測器或者質(zhì)譜分析儀聯(lián)用。等人綜述了液相色譜結(jié)合不同檢測器對于不同食品中生物胺的檢測，與紫外檢測器或熒光檢測器聯(lián)用的靈敏度大大低于與質(zhì)譜(尤其是SRM檢測模式)聯(lián)用的檢測靈敏度；而且常規(guī)方法中生物胺的提取通常采用鹽酸，高氯酸和三氯乙酸等，若用質(zhì)譜檢測，會對儀器產(chǎn)生較大影響；同時，提取過程中所用魚的量和提取溶劑的量都較大，過程比較繁瑣；常用衍生方法是以丹磺酰氯和鄰苯二甲醛等作為衍生試劑，衍生過程需要加熱而且部分衍生物不穩(wěn)定。本發(fā)明中采用液相色譜-三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)靶向分析9中生物胺，極大的排除了基質(zhì)干擾，使分析結(jié)果靈敏度高，線性范圍寬；樣品預處理參照代謝組學中組織樣品的處理方法，稱取少量魚肉組織(約20mg)，采用5-磺基水楊酸作為提取溶劑的珠打研磨方法進行提取，一方面樣品量和提取溶劑量都極大地減少了，屬于環(huán)境友好操作，而且對質(zhì)譜的影響較小，另一方面采用珠打研磨方法，一次可以同時處理20份樣品，極大地縮短了分析時間；此外采用苯甲酰氯衍生生物胺，反應(yīng)僅需要在室溫條件下渦旋10分鐘即可完成，操作也相對簡單，極大地提高了工作效率。至今尚無將本發(fā)明所述方法應(yīng)用于魚肉組織中生物胺分析的報導。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為了進一步改善生物胺的分析方法，建立了基于5-磺基水楊酸作為提取溶劑的珠打研磨提取、苯甲酰氯快速衍生、液相色譜-三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀分析的魚肉組織中生物胺的分析方法。該方法的樣品前處理簡單，且所用樣品量及提取溶劑量都較少，屬于環(huán)境友好型；采用苯甲酰氯作為衍生試劑，衍生反應(yīng)可在10分鐘內(nèi)完成，極大地縮短了樣品的處理時間；采用多反應(yīng)監(jiān)測模式，具有靈敏度高、重復性好、線性范圍寬等優(yōu)點。

本發(fā)明采用的具體技術(shù)方法如下：

(1)將去皮剔骨除內(nèi)臟后的魚肉組織放入料理機中進行粗均質(zhì)(轉(zhuǎn)速為12000轉(zhuǎn)/分，均質(zhì)時間為1-5min)。

實際樣品分析：稱取20mg±0.5mg粗均質(zhì)后的魚肉組織置于2mL ep管中，依次加入氧化鋯小球，300μL濃度為5mg/mL的5-磺基水楊酸溶液，100μL濃度皆為4.5μg/mL的1-庚胺和1,7-庚二胺內(nèi)標溶液，100μL體積濃度為20％的乙腈溶液，之后采用混合研磨儀在20Hz的條件下研磨提取1min，重復2次，研磨提取后的樣品立即放入離心機中，在4℃，14000rpm的條件下離心10min，取離心之后的上清液100μL置于1.5mL ep管備用；