[發(fā)明專利]一種呫噸聚氨基甲酸乙酯半抗原、人工抗原及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610675358.3
• 申請日: 2016-08-16
• 公開（公告）號: CN106317009B
• 公開（公告）日: 2019-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐振林;羅林;孫遠(yuǎn)明;楊金易;雷紅濤;王弘;沈玉棟;劉功良
• 申請（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07D311/86
• 分類號: C07D311/86;C07D311/88;C07K14/765;C07K16/44;C07K16/06;G01N33/52
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

本發(fā)明屬于免疫檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種呫噸聚氨基甲酸乙酯半抗原、人工抗原及其應(yīng)用。所述呫噸聚氨基甲酸乙酯半抗原具有式（I）所示結(jié)構(gòu)，將呫噸聚氨基甲酸乙酯半抗原與載體蛋白偶聯(lián)即可得到呫噸聚氨基甲酸乙酯人工抗原，用上述人工抗原免疫實驗動物，使其機體產(chǎn)生特異地針對呫噸聚氨基甲酸乙酯的抗體；所述抗體可以特異性識別氨基甲酸乙酯占噸醇衍生物—呫噸聚氨基甲酸乙酯，用于間接檢測食品中氨基甲酸乙酯的含量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種呫噸聚氨基甲酸乙酯半抗原、人工抗原及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

氨基甲酸乙酯(Ethyl carbamate，簡稱EC)，又名尿烷或烏拉坦，分子式為C₃H₇NO₂，是一種無色、無味的粉末狀晶體，不易揮發(fā)(沸點182-184℃)，易溶于水和乙醇，是發(fā)酵食品特別是酒精飲料中自然形成的一種化學(xué)污染物，對人類健康具有致癌的潛在威脅；自1943年Nettleship等發(fā)現(xiàn)EC可以導(dǎo)致小鼠細(xì)胞癌變和腫瘤的形成后，EC的致癌性在許多模式動物中(大鼠、小鼠、倉鼠和猴子等)都得到了證明。基于這些實驗結(jié)果，1974年被國際癌癥研究機構(gòu)(IARC)劃為2B級的致癌化合物。此后，研究人員又發(fā)現(xiàn)EC也可以直接誘發(fā)人的肝癌，因此，IARC在2007年將EC的致癌等級由2B級提升到了2A級(與甲醛同級)。隨著檢測技術(shù)的發(fā)展，眾多酒精飲品中陸續(xù)檢測出EC，越來越多的國家對酒精飲品中的EC殘留都做出嚴(yán)格規(guī)定(表1)。目前，我國暫未正式公布EC限量標(biāo)準(zhǔn)，但食品安全部門已經(jīng)在認(rèn)真的考慮中，相信不久之后就會出臺相關(guān)的EC限量條例。

表1 各國對酒精飲品中EC限量標(biāo)準(zhǔn)(μg/L)

目前國內(nèi)外檢測氨基甲酸乙酯的常用方法主要集中在色譜、質(zhì)譜等物化手段定性定量，但這些方法樣品預(yù)處理要求高、步驟復(fù)雜、操作需專業(yè)人員、檢測費用高、所依賴儀器昂貴復(fù)雜、費時費力，很難適應(yīng)許多場合快速檢測的需要，在應(yīng)用上不能廣泛推廣。基于抗原抗體特異性結(jié)合的的免疫學(xué)檢測方法具有簡便、快速、靈敏、高特異性等優(yōu)點，越來越被關(guān)注。國際權(quán)威學(xué)術(shù)刊物將其列為近年來首位優(yōu)先發(fā)展的新分析技術(shù)。但是，目前尚無可用于免疫檢測的氨基甲酸乙酯半抗原、抗原和抗體的相關(guān)報道，使得氨基甲酸乙酯ELISA檢測方法暫時還未建立。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種呫噸聚氨基甲酸乙酯半抗原。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種呫噸聚氨基甲酸乙酯人工抗原。

本發(fā)明的另一個目的是提供上述呫噸聚氨基甲酸乙酯半抗原的制備方法。

本發(fā)明還有一個目的是提供上述呫噸聚氨基甲酸乙酯人工抗原的制備方法。

本發(fā)明還有一個目的是提供上述呫噸聚氨基甲酸乙酯人工抗原在間接檢測氨基甲酸乙酯中的應(yīng)用。

本發(fā)明還有一個目的是提供一種間接檢測氨基甲酸乙酯的方法。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過以下方案予以實現(xiàn)的。

一種呫噸聚氨基甲酸乙酯半抗原，其結(jié)構(gòu)式如式(I)所示：

式(I)；

其中，n＝0～6。

由上述半抗原結(jié)構(gòu)可以看出，本發(fā)明針對氨基甲酸乙酯的呫噸醇衍生物(呫噸聚氨基甲酸乙酯)設(shè)計和制備得到的半抗原在分子結(jié)構(gòu)、立體化學(xué)和電子分布上與呫噸聚氨基甲酸乙酯相似，半抗原結(jié)構(gòu)中的連接臂不易于誘導(dǎo)產(chǎn)生“臂抗體”，并且使用了一定長度的飽和碳鏈，使機體更易于識別。

一種呫噸聚氨基甲酸乙酯人工抗原，其結(jié)構(gòu)式如式(Ⅱ)所示：

式(Ⅱ)；