[發明專利]一種蝦青素十六碳二烯酸單酯的制備方法

有效

• 申請號: 201610671398.0
• 申請日: 2016-08-16
• 公開（公告）號: CN106278980B
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發明（設計）人: 杜希萍;黃瑩;王凱;倪輝;楊遠帆;李利君;姜澤東;肖安風;黃高凌;蔡慧農
• 申請（專利權）人: 集美大學
• 主分類號: C07C403/24
• 分類號: C07C403/24
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種蝦青素十六碳二烯酸單酯的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟一、粗提液的制備：

用天平稱取5.0g雨生紅球藻藻粉，加入濃度為0.5-0.7mg/mL的纖維素酶液200mL，酶反應pH為4.0-5.0，在45-50℃的條件下破壁25-30min，然后在5000rpm條件下離心5min，棄上清后，將500mL的丙酮加入藻粉中，浸提40min，再次離心后，棄去下層沉淀，制得粗提液；將所述粗提液濃縮蒸干，充氮，于-20℃條件下保存，備用；

步驟二、溶劑系統的建立：

按體積比4:1:2配制正己烷-乙腈-甲醇溶劑系統；分別按照上述比例配制溶劑系統溶液1500mL，置于分液漏斗中，劇烈振蕩充分混合后靜置分層，平衡后將上下兩相分開，以下相作為流動相，上相作為固定相，在使用前上下相分別超聲脫氣30min；

步驟三、高速逆流色譜純化：

打開泵，將超聲脫氣后的上相作為固定相以30mL/min的流速泵入到高速逆流色譜儀中，直至上相充滿整個HSCCC分離管中，暫停泵，將進液端放到流動相的試劑瓶中，打開主機的電源，設定轉速850r/min，啟動泵；在出液端用干凈的量筒接液，在474nm波長下采集數據，收集洗脫時間為31-40min的目標成分，初步用TLC分析流出物，合并相同組分，制得化合物，即蝦青素十六碳二烯酸單酯。

2.如權利要求1所述的一種蝦青素十六碳二烯酸單酯的制備方法，其特征在于：還包括步驟四、純化物的鑒定：采用高效液相色譜HPLC法或采用ESI-MS法分析所述化合物，或采用高效液相色譜HPLC法分析皂化后的所述化合物。

3.如權利要求2所述的一種蝦青素十六碳二烯酸單酯的制備方法，其特征在于：所述采用高效液相色譜HPLC法：將所述化合物配成2mg/mL的樣品溶液，高效液相的條件：進樣量5μL，柱溫35℃，檢測波長474nm，流速0.2mL/min；分析所述化合物的保留時間和特征吸收峰，所述化合物的保留時間為44.5min，特征吸收峰為408nm。

4.如權利要求2所述的一種蝦青素十六碳二烯酸單酯的制備方法，其特征在于：所述ESI-MS法采用正離子模式；參數設置如下：氮氣干燥流量10.0L/min，霧化壓力為20psi，毛細管電壓+5000V，端板電壓+4000V，毛細管出口電壓80V，干燥溫度200℃，霧化室溫度50℃，干燥氣體壓力20psi，霧化氣體壓力50psi；一級質譜m/z為832.4。

5.如權利要求2所述的一種蝦青素十六碳二烯酸單酯的制備方法，其特征在于：采用高效液相色譜HPLC法分析皂化后的所述化合物：將所述化合物12.5mg溶解在150mL的二氯甲烷溶液中，作為每組試驗的樣品溶液，然后加入含質量體積濃度為15.6％的NaOH的甲醇溶液，在磁力攪拌條件下，15.14℃溫度下反應9.17min后，終止反應；加入蒸餾水直至溶液出現分層，上層漂浮有白色泡沫，下層呈紅色的澄清溶液，離心棄去上清后，將下層溶液完全蒸干得到皂化產物，用HPLC法分析產物的保留時間和特征吸收峰，皂化后的所述化合物的保留時間為12.7min。

6.如權利要求1所述的一種蝦青素十六碳二烯酸單酯的制備方法，其特征在于：所述步驟一中，加入濃度為0.6mg/mL的纖維素酶液200mL，在50℃的條件下破壁30min。