[發明專利]一種遺傳性乳腺癌突變基因高通量篩查方法

在審

• 申請號: 201610660617.5
• 申請日: 2016-08-12
• 公開（公告）號: CN107723350A
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發明（設計）人: 張道允;鞏子英;葉建偉;王偉
• 申請（專利權）人: 嘉興允英醫學檢驗有限公司
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種基因的篩查方法，尤其是一種遺傳性乳腺癌突變基因的篩查方法。

技術背景

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，發生于乳房腺上皮組織，發病率占全身各種惡性腫瘤的7-10%，嚴重影響婦女身心健康。在我國，乳腺癌發病率增長最快，每年以3-4%的速度在增長，占婦女癌癥死亡第一位。乳腺癌細胞之間連接松散，容易脫落，癌細胞一旦脫落便隨血液或淋巴液播散全身，形成轉移，危及生命。乳腺癌的自然病程通常很長，癌細胞倍增時間平均為90天，往往人們在就診時就發現已有淋巴結轉移。乳腺癌的病因尚未完全清楚，已知乳腺癌家族史是乳腺癌發生的危險因素。根據規律，女性乳腺癌發病率與年齡和易患乳腺癌的高危因素（包括攜帶乳腺癌相關的突變基因）有關。根據乳腺癌患者情況可分為隱形乳腺癌、男性乳腺癌、炎性乳癌、妊娠期和哺乳期乳腺癌。隱形乳腺癌常以淋巴結轉移為首發癥狀。男性乳腺癌較為罕見，只占1%。炎性乳腺癌應用手術或放療的預后較差，平均生存期為4～9個月。目前大多數炎性乳腺癌均采用化療及放療的綜合治療，反復的化療和放療給患者帶來了極大的痛苦。在乳腺癌患者中，家族性乳腺癌占20%～25%，遺傳性乳腺癌占5%-10%。對遺傳性乳腺癌突變基因篩查，有助于乳腺癌的防治，針對易感基因突變的人群，采取積極的預防措施，包括增加體檢頻率、藥物性預防和手術切除，從而降低乳腺癌的危害。

經大量研究，目前已知的遺傳性乳腺癌突變基因包括：BRCA1，BRCA2，TP53，PTEN等。BRCA1和BRCA2兩個基因能編碼具有多重功能的蛋白，其突變表型往往具有誘發乳腺癌和卵巢癌的趨向。目前所知BRCA1和BRCA2與同源重組、DNA損傷修復、胚胎生長、轉錄調控等均有關。BRCA1是調控G/M期關鍵點的調控因子，是激活Chkl激酶所必需的，而后者對DNA損傷時誘導G/M 期阻滯起重要作用。同時，BRCA1 還控制了Cdc25C和Cdc2/ Cyclin B1激酶蛋白的表達、磷酸化以及胞內定位的調節，這兩種蛋白對細胞周期過程中G/M期的順利進行起重要作用。BRCA1在有絲分裂期定位于中心體，并且與中心體的γ-微管蛋白相互作用。p53也能反過來抑制BRCA1的表達，借此達到穩定自身的作用。野生型的BRCA1還能誘導凋亡并且抑制雌激素依賴性轉錄通路，該通路與乳腺上皮細胞增生有關，基因突變后抑制作用減弱而致病。不同人群中的BRCA的突變率及突變基因位點有較大的差異。攜帶有BRCA1 或BRCA2缺陷基因的女性將有高達87%的幾率患上乳腺癌。奧拉帕尼（多（AD P）- 核糖聚合酶 (PARP) 抑制劑）目前已被FDA批準用于遺傳性乳腺癌突變基因BRCA的突變。Tp53是一種腫瘤抑制基因(tumor suppressor gene)。在所有惡性腫瘤中，50%以上會出現該基因的突變。由這種基因編碼的蛋白質(protein)是一種轉錄因子(transcriptional factor)，控制著細胞周期的啟動。p53基因在正常情況下對細胞分裂起著減慢或監視的作用。細胞中抑制癌變的基因"p53"會判斷DNA變異的程度，如果變異較小，這種基因就促使細胞自我修復，若DNA變異較大，"p53"就誘導細胞凋亡。p53基因突變后，由于其空間構象發生改變，失去了對細胞生長、凋亡和DNA 修復的調控作用，p53基因由抑癌基因轉變為癌基因。PTEN是迄今發現的第一個具有雙特異磷酸酶活性的抑癌基因，也是繼p53基因后另一個較為廣泛地與腫瘤發生關系密切的基因。PTEN酶參與化學通路的傳導，可以把信號傳導給細胞，使細胞停止分裂并發生凋亡。這些功能可阻止不受控制的細胞生長進而限制腫瘤的形成。PTEN酶還有協助控制細胞轉移、細胞與周圍組織的粘附、血管發生和維持細胞遺傳信息的穩定性等功能。PTEN的突變會造成PTEN酶的失活，激活PI3K-AKT信號途徑從而致癌。目前，已發現許多與遺傳性癌相關的基因，從中選取了與乳腺癌相關性最高的42個基因。通過測定這些的基因的基因型，預測乳腺癌的風險，從而降低乳腺癌的危害。

近年來，隨著基因組測序技術的迅猛發展，腫瘤個體化分子診斷逐漸成為腫瘤研究領域的熱點。新一代高通量測序技術（NGS）不僅通量大、速度快、靈敏度高，而且大大降低了成本，是目前最先進的基因測序手段。本發明的目的是提供一種快速準確且能夠覆蓋遺傳性乳腺癌突變基因的診斷方法。本發明的基本方案是從血液中提取gDNA，利用超聲打斷構建基因組文庫，然后進行遺傳性乳腺癌突變基因捕獲，利用新一代測序儀進行高通量測序，分析找出遺傳性乳腺癌突變基因的突變情況，達到乳腺癌篩查的目的。

發明內容

本發明提供一種準確度高、預測性好的乳腺癌基因篩查方法。