[發明專利]一套高效分泌表達異源蛋白的工程菌及其應用有效
| 申請號： | 201610649512.X | 申請日： | 2016-08-10 |
| 公開（公告）號： | CN106282079B | 公開（公告）日： | 2019-12-31 |
| 發明（設計）人： | 周志剛;潘興亮;楊雅麟;李志敏;李娟 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院飼料研究所 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C07K14/195;C12N9/18;C12N15/75;C12R1/125 |
| 代理公司： | 11245 北京紀凱知識產權代理有限公司 | 代理人： | 關暢;白艷 |
| 地址： | 100081 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 質量控制體系 胞內蛋白酶 工程菌株 外源蛋白 相關基因 敲除 蛋白 高效分泌表達 枯草芽孢桿菌 感受態細胞 蛋白表達 分泌表達 缺失菌株 一套工具 異源蛋白 工程菌 折疊 失活 分泌 合成 基因 應用 改造 研究 | ||
1.一種重組菌，其特征在于：
通過敲除枯草芽孢桿菌中YrrN蛋白編碼基因的部分片段抑制或沉默枯草芽孢桿菌中YrrN蛋白編碼基因的表達；
通過敲除枯草芽孢桿菌中YwpE蛋白編碼基因的部分片段抑制或沉默枯草芽孢桿菌中YwpE蛋白編碼基因的表達；
所述敲除枯草芽孢桿菌中YrrN蛋白編碼基因的部分片段為將枯草芽孢桿菌中YrrN蛋白編碼基因替換為抗性基因zeocin；
所述敲除枯草芽孢桿菌中YwpE蛋白編碼基因的部分片段為將枯草芽孢桿菌中YwpE蛋白編碼基因替換為抗性基因zeocin；
將枯草芽孢桿菌中YrrN蛋白編碼基因替換為抗性基因為將包括所述YrrN蛋白編碼基因上游同源臂、抗性基因表達盒和所述YrrN蛋白編碼基因下游同源臂的同源重組片段A導入枯草芽孢桿菌中；
將枯草芽孢桿菌中YwpE蛋白編碼基因替換為抗性基因為將包括所述YwpE蛋白編碼基因上游同源臂、抗性基因表達盒和所述YwpE蛋白編碼基因下游同源臂的同源重組片段B導入枯草芽孢桿菌中；
所述同源重組片段A的核苷酸序列為序列2；
所述同源重組片段B的核苷酸序列為序列4；
所述枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌BS168；
使通過上述方法得到的菌表達幾丁質結合蛋白CBP21或淬滅酶AIO6BS；
表達的方法為將幾丁質結合蛋白CBP21的編碼基因或淬滅酶AIO6BS的編碼基因導入通過上述方法得到的菌，從而獲得重組菌。
2.權利要求1中的重組菌在生產幾丁質結合蛋白CBP21和/或提高幾丁質結合蛋白CBP21的分泌表達水平中的應用；
或，權利要求1中的重組菌在生產淬滅酶AIO6BS和/或提高淬滅酶AIO6BS的分泌表達水平中的應用。
3.一種生產外源蛋白的方法，為利用權利要求1所述重組菌，進行外源蛋白表達。
4.一種生產幾丁質結合蛋白CBP21或淬滅酶AIO6BS的方法，包括如下步驟：發酵培養權利要求1所述的重組菌，得到所述幾丁質結合蛋白CBP21或淬滅酶AIO6BS。
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