[發明專利]硼酸衍生物功能化熒光探針在檢測5-羥甲基胞嘧啶中的應用

有效

• 申請號: 201610628830.8
• 申請日: 2016-08-03
• 公開（公告）號: CN106281309B
• 公開（公告）日: 2018-07-10
• 發明（設計）人: 張靜;陳華艷;潘炯秀;張微;魏靜茹
• 申請（專利權）人: 陜西師范大學
• 主分類號: C09K11/06
• 分類號: C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責任公司 61201
• 代理人: 高雪霞

1.硼酸衍生物功能化熒光探針在檢測5-羥甲基胞嘧啶中的應用，其中所述的硼酸衍生物功能化熒光探針是表面固載2-(4-二羥基硼烷)苯基-4-羧基喹啉的聚甲基丙烯酸環氧丙酯納米微球，制備方法為：將聚甲基丙烯酸環氧丙酯納米微球溶解于蒸餾水中，并加入過量乙二胺，在氮氣保護下，80℃反應完全后，離心、洗滌、干燥，得到氨基功能化的聚甲基丙烯酸環氧丙酯納米微球；將氨基功能化的聚甲基丙烯酸環氧丙酯納米微球分散于無水乙醇中，并依次加入2-(4-二羥基硼烷)苯基-4-羧基喹啉、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺，其中氨基功能化的聚甲基丙烯酸環氧丙酯納米微球與2-(4-二羥基硼烷)苯基-4-羧基喹啉、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺的摩爾量比為4:4:9:9，超聲分散均勻，40℃反應完全后，離心分離，產物依次用超純水、無水乙醇和乙腈洗滌，自然干燥，得到表面固載2-(4-二羥基硼烷)苯基-4-羧基喹啉的聚甲基丙烯酸環氧丙酯納米微球，即硼酸衍生物功能化熒光探針。

2.根據權利要求1所述的硼酸衍生物功能化熒光探針在檢測5-羥甲基胞嘧啶中的應用，其特征在于：聚甲基丙烯酸環氧丙酯納米微球的粒徑為150～400nm。

3.根據權利要求1或2所述的硼酸衍生物功能化熒光探針在檢測5-羥甲基胞嘧啶中的應用，其特征在于具體檢測方法由下述步驟組成：

（1）將5-羥甲基胞嘧啶DNA標準樣品與尿苷二磷酸葡萄糖在T4β-葡萄糖基轉移酶的催化作用下，25～37℃反應1～2小時，分離提純產物，得到5-糖基化胞嘧啶DNA；

（2）將硼酸衍生物功能化熒光探針與5-糖基化胞嘧啶DNA加入pH=7.4的磷酸緩沖液中，室溫震蕩反應，用熒光光譜儀測量不同濃度5-糖基化胞嘧啶DNA對應體系的熒光強度，繪制F-F₀值隨5-糖基化胞嘧啶DNA濃度變化的標準曲線；

（3）按照步驟（2）的方法用熒光光譜儀測量待測DNA樣品的熒光強度，根據待測DNA樣品的F-F₀值，結合標準曲線的線性方程即可高選擇性識別5-羥甲基胞嘧啶DNA并確定待測DNA樣品中5-羥甲基胞嘧啶的含量。

4.根據權利要求3所述的硼酸衍生物功能化熒光探針在檢測5-羥甲基胞嘧啶中的應用，其特征在于：在步驟（2）中，所述磷酸緩沖液中硼酸衍生物功能化熒光探針的初始濃度為0.2～1mg/mL。