[發(fā)明專利]同種異基因腫瘤治療劑

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210315977.3
• 申請日: 2004-04-20
• 公開（公告）號: CN103173460A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 托米斯拉夫·多布里克;布格哈特·維蒂希;曼努埃爾·施密特
• 申請（專利權(quán)）人: 莫洛根股份公司
• 主分類號: C12N15/24
• 分類號: C12N15/24;C12N15/27;C12N15/11;C12N15/63;C12N15/117;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/00;C12R1/91
• 代理公司: 永新專利商標(biāo)代理有限公司 72002
• 代理人: 過曉東

本申請是申請日為2004年4月20日的第200480039664.3號發(fā)明名稱為“同種異基因腫瘤治療劑”的中國專利申請的分案申請。

本發(fā)明涉及一種用于治療腫瘤疾病的基于同種異基因腫瘤細(xì)胞的疫苗，以及一種制備這種疫苗的方法。此外，本發(fā)明還涉及轉(zhuǎn)染的人腫瘤細(xì)胞作為疫苗的用途。

除了治療癌性疾病的傳統(tǒng)方法（如放療和化療，從20世紀(jì)50年代以來它們就構(gòu)成了治療進(jìn)展性和播散性腫瘤疾病的唯一選擇）之外，當(dāng)面對著轉(zhuǎn)移性腫瘤時，免疫治療似乎是一種很有前途的方法。

免疫治療的目的是通過來源于基因技術(shù)領(lǐng)域的修飾技術(shù)來增強(qiáng)對抗腫瘤疾病的天然應(yīng)答，據(jù)此增加免疫系統(tǒng)對癌細(xì)胞的“警惕性”，并提高肌體本身對抗腫瘤的防御反應(yīng)。

一些惡性疾病例如進(jìn)展性腎細(xì)胞癌似乎對免疫治療的干預(yù)是相當(dāng)敏感的，但是利用細(xì)胞因子（例如IL-2和IFN-α）的全身治療有時伴有嚴(yán)重的副作用。因此，已經(jīng)發(fā)展出了其他的免疫治療方案。

目前絕大多數(shù)的臨床研究都依賴于取出腫瘤、隨后用治療基因在離體轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞、照射腫瘤細(xì)胞群以及隨后重新植入經(jīng)修飾的腫瘤細(xì)胞。通過這樣的腫瘤疫苗接種，可以不同程度地增加抗腫瘤效應(yīng)，增加的程度依賴于所轉(zhuǎn)染的治療基因。

根據(jù)這種方法以及試驗動物研究的結(jié)果，已經(jīng)批準(zhǔn)了多個I期和II期臨床研究（Finke?et?al.,1997；Wittig?et?al.,2001）。

但是，這些研究的初步結(jié)果表明除了對治療的較好的耐受性之外，僅僅在少數(shù)病例中觀察到了部分或完全反應(yīng)。

基因轉(zhuǎn)移CD40L/CD154能在結(jié)腸癌小鼠模型中誘導(dǎo)腫瘤的根除和免疫力（Sun等，2000）。

本發(fā)明的申請者/受讓人發(fā)現(xiàn)，向腫瘤細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)移人白介素7（IL-7）的表達(dá)質(zhì)粒導(dǎo)致了腫瘤細(xì)胞對免疫系統(tǒng)的效應(yīng)細(xì)胞的敏感性的增加，尤其是自體轉(zhuǎn)移（Finke?et?al.,1997,Cancer?Gene?Ther.4:260-268）。相似地，本發(fā)明者證實(shí)，向自體腫瘤細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)移進(jìn)兩種治療基因（IL-7、GM-CSF）之后，可以在50%患者中觀察到顯著的臨床反應(yīng)（WO02/060476）。

從US5,681,562的闡述中已知，給患有某些癌癥的患者體內(nèi)注射已經(jīng)以編碼細(xì)胞因子的DNA或RNA轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，可刺激患者的免疫系統(tǒng)對抗腫瘤抗原。在專利說明書中，描述了其中用編碼IL-2的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)染小鼠成纖維細(xì)胞的試驗。也描述了一個體內(nèi)試驗，其中在小鼠的結(jié)腸癌模型中測試了治療的療效。與對照組比較，經(jīng)皮下注射轉(zhuǎn)染的成纖維細(xì)胞的小鼠表現(xiàn)出明顯更慢的腫瘤生長。利用人轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞的體外試驗顯示其顯著增加了IL-2的表達(dá)水平。除了缺乏小鼠模型以外的臨床數(shù)據(jù)外，在這些試驗中被采用作為表達(dá)載體的病毒載體也被認(rèn)為是不利的載體。減毒疫苗株的不穩(wěn)定性不能確保其不被逆轉(zhuǎn)成為有毒株，以及病毒組分本身可以是免疫原性的，這將使得患者的免疫系統(tǒng)減弱它們的療效。在此所列的這些缺點(diǎn)僅僅是病毒系統(tǒng)的缺點(diǎn)的一部分，這明顯削弱了該系統(tǒng)作為基因治療載體的用途。

一些文章顯示用細(xì)胞因子基因聯(lián)合生長因子GM-CSF獲得了最佳的治療效果（Paillard,1998,Hum.Gene?Ther.9:2457-2458；Schadendorf?et?al.,1995,J.Mol.Med.73:473-477）。GM-CSF在腫瘤抗原接種中的重要性也體現(xiàn)在其增強(qiáng)針對肽疫苗接種的臨床及免疫學(xué)的抗腫瘤應(yīng)答（et?al.,1996）。呈遞抗原的樹突狀細(xì)胞的活化以及對效應(yīng)細(xì)胞群的刺激似乎在這個方面起到了關(guān)鍵作用。

但是，至今還不清楚哪個細(xì)胞因子基因聯(lián)合免疫原性制劑和GM-CSF能觸發(fā)最有效的抗腫瘤應(yīng)答。

在小鼠試驗中，顯示用編碼IL-7的表達(dá)構(gòu)建體的接種生成了抗腫瘤效應(yīng)（Miller?et?al.,1993,Blood18:3686-3694；Murphy?et?al.,1993,J.Clin.Invest.92:1918-1924）。也顯示細(xì)胞毒淋巴細(xì)胞（CTL）與IL-7或IL-7轉(zhuǎn)染的細(xì)胞進(jìn)行孵育導(dǎo)致了小鼠體內(nèi)的腫瘤消退（Jicha?et?al.,1991；Hock?et?al.,1993），以及用IL-7和B7.1/CD80的轉(zhuǎn)染導(dǎo)致了CD28⁺CD25⁺T細(xì)胞的浸潤及免疫力（Cayeux?et?al.,1995）。

至今還沒有實(shí)現(xiàn)治療的成功，甚至在小鼠模型中也沒有成功。