[發明專利]一種高活性粉狀畢赤酵母菌粉及其制備方法

有效

• 申請號: 201610564272.3
• 申請日: 2016-07-18
• 公開（公告）號: CN105925495B
• 公開（公告）日: 2017-08-25
• 發明（設計）人: 趙躍進;趙躍文;趙躍民;易卿;杜亞楠;趙潔;趙科;謝松;張盼;任寸娟;秦中輝;趙九生
• 申請（專利權）人: 三門峽龍飛生物工程有限公司
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12R1/84
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所(普通合伙)11305
• 代理人: 向華

1.一種粉狀畢赤酵母高活性菌粉的制備方法，其特征在于該制備方法的步驟如下：

A、活化培養

用無菌吸管吸取0.3～0.5mL麥芽汁液體培養基，滴入裝有凍干的粉狀畢赤酵母ACCC20136的安瓿內，輕輕振蕩，使其溶解呈懸浮狀，吸取全部菌懸液，放于1L麥芽汁培養基中，在溫度26～30℃下活化培養2～3d；

所述的麥芽汁液體培養基制備方法如下：在按照大麥芽與水的重量比1:3～5，把水加到大麥芽中，攪拌混合均勻，然后放于保溫箱中在溫度55～60℃下進行糖化3.5～4.5h，過濾，得到的糖化麥芽汁在壓力0.5～0.7kg/cm²下滅菌38～42min，接著用水將滅菌的糖化麥芽汁稀釋至糖度為12波美度，得到所述的麥芽汁液體培養基；

按照以YPD培養基重量計3～5％接種量，將活化培養的粉狀畢赤酵母ACCC20136接種于YPD培養基斜面上，在溫度26～30℃下斜面培養2～3d；

B、一級種子培養

使用接種環挑取一環斜面培養的粉狀畢赤酵母ACCC20136，接種于50～80mL YPD液體培養基中，在溫度28～32℃與轉速200～250rad/min條件下振蕩培養，直到培養液OD_600nm達到12.0～15.0時得到一級種子液；

C、制備高密度液體發酵培養基

將1～3重量份葡萄糖、0.5～1.5重量份蛋白胨、0.1～0.5重量份磷酸二氫鉀、0.01～0.05重量份硫酸鎂、0.03～0.06重量份硫酸亞鐵、0.03～0.06重量份硫酸錳與補充至1000重量份蒸餾水混合均勻，然后在壓力0.11～0.15MPa與溫度121℃～125℃的條件下滅菌18～22min，接著使用濃度為以體積計22～28％的氨水將其pH值調節至5.0～6.0，得到一種高密度液體發酵培養基；

D、發酵培養

按照以液體發酵培養基重量計6～10％的接種量，將步驟B得到的種子液接種于在步驟C得到的高密度液體發酵培養基中，在培養溫度28～32℃、初始pH 5.5、壓力0.03～0.06MPa、轉速200～350rad/min與通氣比1：1～2.5的條件下進行發酵培養；與此同時，通過通氣比、壓力與轉速調整，將整個發酵過程中溶解氧DO控制在≧20％，通過滴加濃度為以體積計22～28％的氨水將在整個發酵過程中發酵培養液的pH值控制在5.5～6.5；

E、補料

在整個發酵培養過程中，在通氣量、壓力與轉速不變時，如果溶解氧DO在1min內升高30％以上時，需要按照發酵培養基體積計18～22％的添加量，往發酵培養液中添加由35～45重量份葡萄糖與5～15重量份硫酸鎂組成的補料培養基；

F、添加輔料

在發酵培養結束前0.5～1h，按照發酵培養基體積計1～3％的添加量添加甘露醇保護劑與2～6％的添加量添加吐溫80，充分混勻；接著在離心轉速2000～4000rpm的條件下離心濃縮2～4倍；再按照發酵培養基體積計20～30％的添加量添加米糠載體、20～30％的添加量添加加益粉載體，充分混勻，接著輸送至冷風干燥機中進行冷風干燥，得到粉狀畢赤酵母高活性菌粉。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于在步驟C中，高密度液體發酵培養基由2重量份葡萄糖、1重量份蛋白胨、0.3重量份磷酸二氫鉀、0.03重量份硫酸鎂、0.05重量份硫酸亞鐵、0.05重量份硫酸錳與補充至1000重量份蒸餾水組成。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于在步驟E中，所述的補料培養基在蒸汽壓力102～104kPa與溫度110～117℃的條件下滅菌18～22min。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于在步驟E中，在整個發酵培養過程中添加8～10次所述的補料培養基。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于整個發酵培養時間是36～48h。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于在步驟F中，在溫度為5～15℃的條件下進行冷風干燥4～5h。

7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于在步驟F中，所述的米糠載體粒度是100～150目。

8.根據權利要求1所述制備方法制備得到的高活性粉狀畢赤酵母菌粉，其特征在于粉狀畢赤酵母有效活菌數CFU≧60.0億/g；雜菌率≦10.0％；水分5.5-7.0％；pH值5.5～6.5；在溫度25℃以下保存6個月時菌數保存率≧75％。