[發(fā)明專利]一種平菇菌種鑒別的方法及專用DNA條形碼片段

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610554693.8
• 申請日: 2016-07-14
• 公開（公告）號: CN105950776B
• 公開（公告）日: 2018-02-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙鵬;紀(jì)森鵬;周軍輝;高興喜
• 申請（專利權(quán)）人: 魯東大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11245
• 代理人: 關(guān)暢,白艷

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及DNA條形碼快速鑒別食用菌菌種，尤其涉及一種平菇菌種鑒別的方法及專用DNA條形碼片段。

背景技術(shù)

食用菌是我國主要的經(jīng)濟作物和出口農(nóng)產(chǎn)品。我國食用菌產(chǎn)業(yè)經(jīng)過30多年高速發(fā)展，2014年產(chǎn)量已超過2800萬噸、產(chǎn)值超過2000億元，已成為世界上最大的食用菌生產(chǎn)大國。其中平菇產(chǎn)量最大，達(dá)560萬噸，居世界第一。菌種質(zhì)量好壞對食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展十分重要。食用菌產(chǎn)業(yè)有“一支母種影響一個食用菌產(chǎn)業(yè)”的說法。菌種在平菇產(chǎn)業(yè)的發(fā)展中起著重要的、不可替代的作用。近年來菌種事故多數(shù)是菌種錯誤造成的，菌種隨意改名，假冒偽劣菌種擾亂市場，坑農(nóng)時間時有發(fā)生。因此，菌種的真實性檢測在平菇菌種質(zhì)量檢測中顯得至關(guān)重要。

常規(guī)檢測手段主要有：肉眼感官觀察、菌絲生長速度、農(nóng)藝性狀和商品性狀檢驗、同工酶電泳法、ISSR法等。這些方法耗時多，具有一定的組織與發(fā)育階段的特異性，結(jié)果不可靠。

DNA條形碼技術(shù)是利用一段標(biāo)準(zhǔn)、通用的DNA序列，實現(xiàn)對物種進行快速準(zhǔn)確鑒定的目的。該技術(shù)鑒定樣品具有不受其生長發(fā)育階段影響、所需材料少，操作簡單，所需時間短，結(jié)果可靠等優(yōu)勢，可以實現(xiàn)對平菇菌種快速可靠的物種鑒定。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個目的是提供一種DNA片段。

本發(fā)明提供的DNA片段，為如下1)或2)或3)：

1)、序列3所示的DNA片段；

2)、序列3第21-375位核苷酸所示的DNA片段；

3)、為與1)或2)所示片段的核苷酸序列同源性大于99％的片段。

本發(fā)明的另一個目的是提供所述DNA片段的新用途。

本發(fā)明提供了所述DNA片段在鑒別或輔助鑒別平菇菌種中的應(yīng)用。

本發(fā)明第3個目的是提供檢測平菇菌種基因組中是否含有所述DNA片段的物質(zhì)的新用途。

本發(fā)明提供了檢測平菇菌種基因組中是否含有所述DNA片段的物質(zhì)在鑒別平菇菌種中的應(yīng)用。

上述應(yīng)用中，所述檢測平菇菌種基因組中是否含有所述DNA片段的物質(zhì)為如下1)或2)：

1)用于擴增所述DNA條形碼片段的引物對；

2)含有所述引物對的PCR試劑或試劑盒。

上述應(yīng)用中，所述引物對由序列表中序列1所示的單鏈DNA分子和序列表中序列2所示的單鏈DNA分子組成。

或所述PCR試劑中，所述引物1和所述引物2的摩爾比為1:1。

或所述PCR試劑中，所述引物1和所述引物2的濃度均為10μmol/L。

本發(fā)明第4個目的是提供一種鑒別或輔助鑒別平菇菌種的方法。

本發(fā)明提供的方法，包括如下步驟：檢測待測樣品中是否含有所述DNA片段；如果含有，則待測樣品為或候選為平菇菌種；如果不含有，則待測樣品不為或候選不為平菇菌種。

上述方法中，

所述檢測待測樣品中是否含有所述DNA片段的方法包括如下步驟：

1)用序列表中序列1所示的單鏈DNA分子和序列表中序列2所示的單鏈DNA分子組成的引物對對待測樣品進行PCR擴增，得到PCR擴增產(chǎn)物；

2)測序所述PCR擴增產(chǎn)物，將所述PCR擴增產(chǎn)物的序列與所述DNA片段進行比對，若同源性大于99％，則待測樣品中含有所述DNA片段，若同源性小于等于99％，則待測樣品中不含有所述DNA片段。

上述方法中，

所述PCR擴增的模板為待測樣品的基因組DNA。

本發(fā)明第5個目的是提供檢測平菇菌種基因組中是否含有所述DNA片段的物質(zhì)。

本發(fā)明提供的檢測平菇菌種基因組中是否含有所述DNA片段的物質(zhì)，其為如下1)或2)：

1)用于擴增所述DNA條形碼片段的引物對；

2)含有所述引物對的PCR試劑或試劑盒。

上述物質(zhì)中，所述引物對由序列表中序列1所示的單鏈DNA分子和序列表中序列2所示的單鏈DNA分子組成。

或所述PCR試劑中，所述引物1和所述引物2的摩爾比為1:1。

或所述PCR試劑中，所述引物1和所述引物2的濃度均為10μmol/L。

為克服形態(tài)特征、生化及傳統(tǒng)分子標(biāo)記鑒定平菇菌種的缺陷，本發(fā)明提供了一種平菇(Pleurotus cornucopiae，白黃側(cè)耳，又名小平菇、美味側(cè)耳、紫孢平菇、平菇)菌種DNA條形碼鑒定方法，可以快速準(zhǔn)確地鑒別平菇菌種。