[發明專利]抗FGFR2-IIIc單克隆抗體、雜交瘤細胞株和應用

在審

• 申請號: 201610438070.4
• 申請日: 2016-06-17
• 公開（公告）號: CN107513106A
• 公開（公告）日: 2017-12-26
• 發明（設計）人: 常小迦;施麗君
• 申請（專利權）人: 艾托金生物醫藥（蘇州）有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N5/20;A61K39/395;A61P35/00;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/574;C12R1/91
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司31266
• 代理人: 陳詳,劉妍珺

1.一種抗FGFR2-IIIc單克隆抗體，其特征是，所述抗FGFR2-IIIc單克隆抗體特異性識別和結合SEQ ID NO:4所示的蛋白，并且所述抗FGFR2-IIIc單克隆抗體不與SEQ ID NO:5所示的蛋白結合。

2.如權利要求1所述的抗FGFR2-IIIc單克隆抗體，其特征在于，所述抗FGFR2-IIIc單克隆抗體與保藏號為CGMCC No.6905雜交瘤細胞株產生的參照抗體相比，具有選自下組的一種或多種特性：

(1)所述抗FGFR2-IIIc單克隆抗體的重鏈可變區的三個CDR區與所述參照抗體的重鏈可變區的三個CDR區相同；

(2)所述抗FGFR2-IIIc單克隆抗體的輕鏈可變區的三個CDR區與所述參照抗體的輕鏈可變區的三個CDR區相同；

(3)所述抗FGFR2-IIIc單克隆抗體的重鏈可變區與所述參照抗體的重鏈可變區相同；和

(4)所述抗FGFR2-IIIc單克隆抗體的輕鏈可變區與所述參照抗體的輕鏈可變區相同。

3.如權利要求1所述的抗FGFR2-IIIc單克隆抗體，其特征在于，所述抗FGFR2-IIIc單克隆抗體為保藏號為CGMCC No.6905雜交瘤細胞株產生的單克隆抗體。

4.一種雜交瘤細胞株，保藏編號：CGMCC No.6905；所述雜交瘤細胞株能夠產生抗FGFR2-IIIc單克隆抗體，該抗FGFR2-IIIc單克隆抗體是對SEQ ID NO:4所示的蛋白能特異性結合的單克隆抗體。

5.一種重組蛋白，其特征在于，所述的重組蛋白具有：

(i)如權利要求1所述的單克隆抗體；以及

(ii)任選的協助表達和/或純化的標簽序列。

6.一種免疫偶聯物，其特征在于，該免疫偶聯物含有：

(a)如權利要求1所述的單克隆抗體；和

(b)選自下組的偶聯部分：可檢測標記物、藥物、毒素、細胞因子、放射性核素、或酶。

7.一種藥物組合物，其特征在于，它含有：

(i)如權利要求1所述的單克隆抗體、或如權利要求5所述的重組蛋白、或如權利要求6所述的免疫偶聯物；以及

(ii)藥學上可接受的載體。

8.如權利要求1所述的單克隆抗體、如權利要求5所述的重組蛋白、或如權利要求6所述的免疫偶聯物的用途，其特征在于，用于制備藥劑、試劑、檢測板或試劑盒；

所述試劑、檢測板或試劑盒用于：

(1)檢測樣品中SEQ ID NO:4所示的蛋白；和/或

(2)檢測腫瘤細胞中SEQ ID NO:4所示的蛋白；和/或

(3)檢測表達SEQ ID NO:4所示的蛋白的腫瘤細胞；

所述藥劑用于治療或預防表達SEQ ID NO:4所示的蛋白的腫瘤。

9.一種產生抗FGFR2-IIIc單克隆抗體的雜交瘤細胞株的制備方法，包括以下步驟：

(1)以SEQ ID NO:3所示的融合蛋白作為抗原，免疫哺乳動物；

(2)制備表達SEQ ID NO:6所示融合蛋白的CHO-FGFR2-IIIc-Δc細胞株；

(3)將CHO-FGFR2-IIIc-Δc細胞株對所述哺乳動物進行加強免疫；

(4)將加強免疫后的哺乳動物的脾細胞與骨髓瘤細胞進行融合，培養；篩選，得到分泌對SEQ ID NO:4所示的蛋白有特異性反應的單克隆抗體的雜交瘤細胞株。

在另一優選例中，所述CHO-FGFR2-IIIc-Δc細胞株的制備為：通過Hind III/Xba I酶切位點將SEQ ID NO:2所示的序列克隆至pcDNA3.0載體中，構建成pcDNA3.0-Flag-FGFR2-IIIc-Δc表達載體；再將pcDNA3.0-Flag-FGFR2-IIIc-Δc表達載體轉染到CHO細胞，培養；篩選得到表達SEQ ID NO:6所示融合蛋白的CHO-FGFR2-IIIc-Δc細胞株。

10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，所述融合比率是脾細胞：骨髓瘤細胞SP2/0為4.5—5.5:1。