[發明專利]一種芽孢桿菌HZ16中抑制軍團菌活性物的制備方法

有效

• 申請號: 201610388229.6
• 申請日: 2016-06-02
• 公開（公告）號: CN107460140B
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 王宏鵬;李音;于林凱;吳元鋒;黃俊;楊瑞芹;劉士旺;毛建衛
• 申請（專利權）人: 浙江科技學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K35/742;A61P11/00;A61P31/04;C12R1/07
• 代理公司: 杭州宇信知識產權代理事務所(普通合伙) 33231
• 代理人: 張宇娟

本發明公開了一株能夠產抑制軍團菌活性物的芽孢桿菌以及利用該芽孢桿菌制備抑制軍團菌活性物的方法。本發明首次證明了該株菌的代謝產物的抑制軍團菌活性，以該活性作為評估標準對該菌株產生較強活性的發酵條件進行研究。旨在提供一種利用芽孢桿菌生產抑制軍團菌活性物的新方式，為進一步尋找和開發有效的肺炎治療藥物提供科學依據。

技術領域

本發明涉及微生物活性物開發利用領域，具體涉及一株芽孢桿菌菌株的活性，以及發酵制備生物活性組分的工藝方法，及其產物在新藥開發方面的應用。

背景技術

一株芽孢桿菌HZ16顯示了針對軍團菌屬獨特的高選擇抑制活性。不同于一般芽孢桿菌產生廣譜抗生素的特點，該株菌對軍團菌屬以外的革蘭氏陽性及陰性菌的抑制活性太弱或未檢出。廣譜抗生素的缺點是在作用于一種微生物的同時還可能殺死其它有益或無害的微生物，并在形成耐藥性時產生普遍的耐藥性，為今后其它疾病的治療帶來困難。

芽孢桿菌屬是芽孢桿菌目芽孢桿菌科最大的一屬，也是產生醫用抗生素的三個主要來源之一。外界環境對微生物次生代謝產物的產生有很大的影響，不同的發酵培養條件可以產生不同結構，不同生物活性的化合物。為了得到更有價值的活性物，必須對菌株和發酵條件進行摸索和研究。

發明內容

本發明首次證明了該株芽孢桿菌代謝產物的抑制軍團菌活性，并對其產生較強活性的發酵條件進行研究。利用生物質資源的可再生、易獲得、成本低、無污染等特點，開展生物制藥的研發。為實現上述目的，本發明擬采用如下方案：

本發明一方面涉及一株能夠產抗軍團菌活性物的芽孢桿菌，所述的芽孢桿菌保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏編號為CGMCC No.12406。本發明另一方面還涉及使用上述芽孢桿菌制備抗軍團菌活性物的應用，優選的，所述的抗軍團菌活性物能夠用于制備治療肺炎藥物。

本發明另一方面涉及從芽孢桿菌HZ16制備抗軍團菌活性物的方法，所述的制備方法包括以下步驟：

將純化得到的芽孢桿菌HZ16接種到培養基上，發酵后獲得固體培養菌落，接種到搖瓶培養基發酵獲得發酵液，將發酵獲得的產物冷凍干燥除掉水分，用有機溶劑提取獲得粗提物。

在本發明的一個優選實施方式中，所述的培養基pH值為4-8或者為4、5、6、7、8。

在本發明的一個優選實施方式中，所述的培養基為LB、復合培養基、PDA、查氏、M₂、M₂50％SW、高氏等。

培養基配方：

復合培養基(g/L)：氯化鈣0.5，磷酸二氫鉀(KH₂PO₄)0.1，氯化鉀(KCl)0.05，硫酸鎂(MgSO₄)0.1，葡萄糖20.0，蛋白胨15。

PDA培養基(g/L)：土豆200，葡萄糖200，1.1％瓊脂。

查氏培養基(g/L):蔗糖30，NaNO₃ 3，K₂HPO₄ 1，FeSO₄ 0.01，KCl 0.5，MgSO₄·7H₂00.5。

M₂培養基：麥芽提取物10，葡萄糖4，酵母提取物4。

M₂50％SW培養基：麥芽提取物10，葡萄糖4，酵母提取物4，檸檬酸鐵0.05，NaCl9.725，MgCl₂·6H₂O 4.4，Na₂SO₄ 1.72，CaCl₂ 0.9，磷酸氫鈉0.01，SiO₂0.0075。