[發(fā)明專利]氨磺樂靈浸漬刺葡萄種子的倍性誘變方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610374937.4
• 申請日: 2016-05-31
• 公開（公告）號: CN105918118B
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔡冬元;林繼華;劉芳;歐陽英;徐一蘭;鄧建平
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南生物機(jī)電職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號: A01H1/08
• 分類號: A01H1/08
• 代理公司: 長沙正奇專利事務(wù)所有限責(zé)任公司43113
• 代理人: 郭立中,蔣尊龍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種氨磺樂靈浸漬刺葡萄種子的倍性誘變方法。

背景技術(shù)

刺葡萄(V.davidii.Foex)屬東亞種群，2n＝38，是我國南方主要野生葡萄之一，主要分布在長江以南亞熱帶溫濕雨林叢山中，能較好適應(yīng)高溫多濕氣候條件，對葡萄常患病害白腐病、炭疽病、黑痘病等具有很好抗性，適應(yīng)性強(qiáng)，這一獨(dú)特表現(xiàn)為南方葡萄無公害化種植描繪了廣闊前景，也為葡萄耐濕性砧木及新品種選育等方面提供了優(yōu)秀資源與材料。刺葡萄的新蔓、嫩葉與果實(shí)色彩非常豐富，觀賞效果與價(jià)值比普通葡萄更高，是公園、庭院等處優(yōu)良垂直觀賞綠化植物。大多數(shù)刺葡萄果粒的皮色為蘭黑色或蘭紫色，藥用效果與價(jià)值比一般葡萄更顯著，更有利于人們身體健康。與栽培于長江以南的其它葡萄相比，刺葡萄更適于葡萄的加工與釀酒，其附加產(chǎn)品更豐富，附加值更高。因刺葡萄具有上述幾方面獨(dú)特表現(xiàn)，長江以南許多地方的農(nóng)民已把野生刺葡萄家植化并獲得了極大成功。

刺葡萄果粒較小，果內(nèi)含種子較多。已有利用秋水仙素處理刺葡萄已萌動(dòng)種子和生長芽，誘其染色體加倍而成功獲得刺葡萄多倍體的研究報(bào)道。但秋水仙素是一劇毒植物堿，操作過程中稍有不慎，即對處理對象和操作者帶來極大危害。氨磺樂靈(oryzalin；CAS為19044-88-3，分子式：C₁₂H₁₈N₄O₆S，分子量：346.36)，又叫黃草消(除草劑)、安磺靈、氨磺靈、消草磺靈等，當(dāng)前生產(chǎn)上主要用于雜草的芽前除草。它和秋水仙素一樣，是一種抗微管物質(zhì)，當(dāng)它們與正在分裂的植物細(xì)胞接觸后，能有效抑制微管的聚合過程，阻礙紡錘絲形成，從而誘使植物細(xì)胞核內(nèi)染色體成功加倍。近年來，國外已有將氨磺樂靈作用于蘋果、梨、獼猴桃等植物染色體，并成功使這些植物染色體加倍的報(bào)道，認(rèn)為氨磺樂靈是除秋水仙素外又一適合植物染色體加倍的化學(xué)試劑，與秋水仙素相比，氨磺樂靈具有低毒性、低濃度、低成本、高效率誘導(dǎo)染色體加倍等特點(diǎn)，是一種新型的植物倍性誘變劑。

邵果園等人在《中國南方果樹》2013，42(6)：24-27上公開了“氨磺樂靈在園藝植物倍性育種上的應(yīng)用”，該文章主要介紹了氨磺樂靈作用于蘋果、獼猴桃、梨、百合等植物染色體并誘使其加倍。而葡萄屬植物，特別是刺葡萄，與上述植物在植物學(xué)分類、生長特征與生長習(xí)性等方面存在很大差別。

現(xiàn)在國內(nèi)還沒有將氨磺樂靈運(yùn)用于刺葡萄并誘導(dǎo)刺葡萄染色體加倍的成功報(bào)道，本研究的意義是首次利用氨磺樂靈(Oryzalin)作用于已萌動(dòng)的刺葡萄種子并對其進(jìn)行倍性誘導(dǎo)，為得到粒大優(yōu)質(zhì)，少籽或無籽的刺葡萄多倍體新品種提供優(yōu)良的種質(zhì)資源與新品系。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明解決的技術(shù)問題是，將氨磺樂靈應(yīng)用于刺葡萄種子的倍性誘變，并探索合適的倍性誘變條件。

本發(fā)明的技術(shù)方案是，提供一種氨磺樂靈浸漬刺葡萄種子的倍性誘變方法，包括以下步驟：

(1)將氨磺樂靈溶于二甲基甲酰胺中，再用水稀釋至氨磺樂靈的質(zhì)量濃度為0.0025％-0.0035％，得氨磺樂靈溶液；

(2)將處于露白階段的刺葡萄種子浸漬于氨磺樂靈溶液中12-36小時(shí)，即完成刺葡萄種子的倍性誘變。

進(jìn)一步地，所述氨磺樂靈溶液中二甲基甲酰胺的質(zhì)量濃度為0.04％-0.08％。

進(jìn)一步地，所述刺葡萄種子浸漬于氨磺樂靈溶液中的溫度為24-28℃。

進(jìn)一步地，所述刺葡萄種子的浸漬時(shí)間為20-28小時(shí)。

進(jìn)一步地，所述氨磺樂靈溶液中氨磺樂靈的質(zhì)量濃度為0.003％。

進(jìn)一步地，在刺葡萄種子浸漬于氨磺樂靈溶液的過程中，晃動(dòng)或攪動(dòng)氨磺樂靈溶液。

根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)的內(nèi)容，發(fā)明人嘗試將0.1％的氨磺樂靈溶液直接用于刺葡萄種子的倍性誘變，發(fā)現(xiàn)誘變效果很差，誘變率很低，不到10％。