[發明專利]用于檢測磺胺類化合物的組合檢測試劑及其檢測方法

有效

• 申請號: 201610347829.8
• 申請日: 2016-05-23
• 公開（公告）號: CN106018602B
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 李鷹飛
• 申請（專利權）人: 青島鎣康食品檢測技術服務有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 青島聯信知識產權代理事務所37227
• 代理人: 潘晉祥

技術領域

本發明屬于藥物檢測技術領域，具體涉及一種用于檢測磺胺類化合物的組合檢測試劑及其檢測方法。

背景技術

磺胺類藥物(SAs)是指具有對氨基苯磺酰胺結構的一類藥物的總稱，具有抗菌譜廣、療效強等優點，是目前養殖業中最常使用的抗生素之一。由于SAs在體內的作用時間和代謝時間較長，通過任何途徑攝入的磺胺都有可能在人體中蓄積，濃度超過一定值后對人體機能會產生危害。SAs藥物毒性作用主要體現在腎損傷、致腫瘤作用、過敏反應、造血機能破壞、消化系統障礙等。由于磺胺的危害較大，且在養殖中使用較多，因此歐盟、美國、日本等國家對橫胺類藥物在動物源性食品中的殘留限量要求不斷提高，許多磺胺類藥物已經被列為禁用獸藥。為了保證食品質量安全，需要快速、準確、廉價的多殘留方法檢測食品中的磺胺類藥物殘留。磺胺類藥物殘留的檢測方法主要有酶聯免疫法、高效液相色譜法、氣相色譜-質譜法、高效液相色譜-串聯質譜法、毛細管電泳法、生物免疫法等。酶聯免疫法和放射免疫法主要用于大規模的篩選工作，容易出現假陽性，一般不用于定量；氣相色譜法用電子捕獲檢測器進行定量分析，具有較高的特異性，但該方法較為繁瑣，不易操作；高效液相色譜紫外檢測法和毛細管電泳法靈敏度低，特異性差，特別是在低濃度檢測時樣品基質干擾大，很難準確地定性確認；氣相色譜-質譜法雖然靈敏度和特異性都很高，但衍生過程繁瑣，不適用于高通量分析。

發明內容

針對上述磺胺類藥物檢測的現狀，本發明的目的是提供了一種用于檢測磺胺類化合物的組合檢測試劑及其檢測方法，本發明提供的組合檢測試劑可以檢測畜、禽肉、組織及其相關制品和畜、禽尿、唾液等體液生物樣品中多達28種磺胺類藥物。

為實現上述發明目的，本發明采用以下技術方案予以實現：

本發明提供了用于檢測磺胺類化合物的組合檢測試劑，所述組合檢測試劑包括：含有多種磺胺類化合物對照品的有機溶劑溶液和蛋白沉淀劑，含有的每種磺胺類化合物對照品在有機溶劑溶液中的濃度均為0.1ng-20ng/mL，所述蛋白沉淀劑為甲醇、乙腈或乙酸乙酯。

進一步的：所述含有多種磺胺類化合物對照品的有機溶劑溶液為含有28種磺胺類化合物的體積比為50％的甲醇溶液；所述28種磺胺類化合物分別為：磺胺甲嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺氯噠嗪、磺胺苯酰、磺胺地索辛、磺胺喹惡啉、磺胺苯吡唑、磺胺硝苯、磺胺嘧啶、磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、周效磺胺、磺胺甲鯻唑、磺胺脒、甲氧芐啶、磺胺甲二唑、磺胺間二甲嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺間二甲氧嗪、磺胺索嘧啶、磺胺喹沙啉、磺胺對甲氧嘧啶、磺胺、磺胺異鯻唑和磺胺二甲鯻唑。

進一步的：所述組合檢測試劑還包括流動相添加劑，所述流動相添加劑為甲酸和甲酸銨的復合。

進一步的：所述蛋白沉淀劑為乙腈。

本發明還提供了利用所述的用于檢測磺胺類化合物的組合檢測試劑的檢測方法，所述檢測方法包括以下步驟：

(1)生物樣品預處理：對待檢測樣品利用液液萃取法、蛋白沉淀法或濾膜過濾法進行預處理；

(2)取所述含有多種磺胺類化合物對照品的有機溶劑溶液直接進樣；獲得每種磺胺類化合物的標準曲線；得到線性方程、相關系數和線性范圍；

(3)對預處理后的待檢測樣品進行液相色譜串聯質譜檢測：

(4)將質譜檢測得到的各磺胺類化合物的峰面積，代入步驟(2)中對照品獲得的標準曲線，得到對應磺胺類化合物的含量。

進一步的：所述步驟(1)中液液萃取法為：將固體待檢測樣品粉碎，加水，勻漿，加入的水體積與樣品重量比為1:1-6:1；之后勻漿液用乙酸乙酯萃取，離心，35-45℃的條件下將有機相吹干，加入甲醇復融，離心，取上清液用于分析。

進一步的：所述步驟(1)中蛋白沉淀法為：將固體待檢測樣品粉碎，加水，勻漿；之后勻漿液加入甲醇或乙腈沉淀，所述甲醇或乙腈的加入體積與樣品重量比為1:1-6:1；離心，取上清液，微孔濾膜過濾，取濾液用于分析。

進一步的：所述步驟(1)中濾膜過濾法為：將液體待檢測樣品用微孔濾膜過濾，濾液加入甲醇或乙腈沉淀，所述甲醇或乙腈的加入體積與樣品重量比為1:1-6:1；離心，取上清液用于分析。

進一步的：所述步驟(3)中色譜條件為：采用硅膠鍵合相填料柱，流動相由A相+B相組成：A相為乙腈水，含體積百分比為0.002％-0.1％的甲酸，B相為乙腈，含體積百分比為0.002％-0.1％的甲酸，A相：B相的體積比為1-99％：99-1％。