[發明專利]一種適宜稻曲病菌產孢的核糖培養基及其應用方法

在審

• 申請號: 201610345507.X
• 申請日: 2016-05-24
• 公開（公告）號: CN105779373A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 張君成;王忠文;曾東強;楊平;蒲相君
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12N3/00
• 分類號: C12N3/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及植物病理學技術和微生物學技術。具體是一種適宜稻曲病菌產 孢的核糖培養基及其應用方法。

背景技術

在大多數真菌病害系統中，病原菌的繁殖體除了具有繁殖擴大自身種群數 量等作用外，更重要的是擁有與寄主互作識別，并發動侵染寄主的功能，因此 在許多重要的植物病害研究過程中，都需要使用病原菌的繁殖體作試驗材料， 顯而易見，高效便捷的繁殖體材料的培養制備方法，將非常有利于研究工作的 順利開展。稻曲病(由Ustilaginoideavirens(Cooke)Takahashi侵染引起)已成為 我國水稻生產的一種重大病害，稻曲病菌的繁殖體包括有性態的子囊孢子、無 性態的厚壁分生孢子和薄壁分生孢子三種類型，在實驗室內，至今的研究工作 主要是使用薄壁分生孢子(下文將薄壁分生孢子簡稱為“孢子”)。

至今，大家熟知的稻曲病菌薄壁分生孢子的培養制備技術，主要是液體培 養方法，該方法的主要技術步驟是，先培養準備稻曲病菌的菌絲體，再將菌絲 體移植入液體培養基進行振蕩培養。實踐工作中發現，該培養方法存在一些不 足，如耗時較長，整個過程一般需要15天以上；需要振蕩培養設備；培養產物 混合液中包含有大量的菌絲團、菌體代謝產物和培養基組分等。采用該技術的 培養產物中，雖然包含有大量的孢子，但要獲得較為單純的孢子液，往往需要 濾掉菌絲和沉淀孢子等后續處理，由于培養產物呈粘稠狀態，沉淀孢子往往需 要高速離心機設備。

最近的進展已經建立了稻曲病菌薄壁分生孢子的平板培養制備技術，該技 術方法采用常規的馬鈴薯蔗糖瓊脂培養基培養制備孢子。用馬鈴薯蔗糖瓊脂培 養基制備孢子能克服液體培養方法的一些弊病。但以該培養基制備孢子的技術 也存在一些明顯不足，在產孢高峰后，平板菌落上很快生長大量的非產孢氣生 菌絲，導致孢子數量急劇下降，不能在較長時期內的穩定提供孢子使用；而且 收集制備培養結果的新孢子液中仍存在較多的菌絲碎段。

發明內容

本發明的目的是提供一種適宜稻曲病菌產孢的核糖培養基及其應用方法， 利用非高溫滅菌的核糖制成馬鈴薯核糖培養基，作為產孢培養基，培養制備稻 曲病菌薄壁分生孢子。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下：

一種適宜稻曲病菌產孢的核糖培養基及其應用方法，操作步驟如下：

1.制備基礎培養基

按配比為：馬鈴薯100g、瓊脂20g、水900ml，制備基礎培養基，每瓶裝 90ml，常規高溫滅菌后備用。

2.核糖的過濾滅菌

按配比為：核糖10g、水100ml，用水將核糖配成核糖溶液，在無菌條件下 用細菌過濾器將該核糖溶液進行過濾滅菌，備用。

3.制備核糖培養基平板

將步驟1制備的基礎培養基加熱熔化，水浴平衡至60℃，同時將步驟2過 濾滅菌的核糖溶液在水浴中平衡至60℃，然后將二者同時轉移到超凈工作臺無 菌環境中，取10ml核糖溶液轉入1瓶基礎培養基中，搖動混合均勻后倒培養皿 成為含有核糖的培養基平板；該培養平板的組分配比為：馬鈴薯100g，核糖10g， 瓊脂20g，水1000ml。

4.植入稻曲病菌

取出以孢子形式備存的稻曲病菌孢子液，無菌條件下將該孢子液植入步驟3 準備完畢的培養平板，用T形玻棒將孢子液均勻涂布于平板面上。

5.恒溫培養

將步驟4操作完畢的培養平板轉入培養箱內，28℃恒溫培養。

6.新一代孢子的收集

步驟5操作實施培養5天后，稻曲病菌能在培養平板上形成大量新一代薄 壁分生孢子；將培養平板轉到超凈工作臺上，用無菌水洗刷平板上的菌落，能 獲得新的純凈孢子液。

本發明的優點：

1)獲得大量新一代孢子所需時間短，一般僅需要4～6天；持續時間長， 能維持大量產孢時間超過15天。

2)操作技術簡易便捷，無需振蕩培養設備；

3)新一代孢子液較為純凈，混雜的菌絲碎較少，通常無需凈化處理也適合 許多研究工作的使用。

附圖說明

圖1是利用本發明的培養基及其應用方法，培養稻曲病菌5天后形成的微 小菌落，菌落上形成大量新一代薄壁分生孢子。