[發(fā)明專利]基于化學(xué)發(fā)光法檢測MUC?16含量的試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610345349.8
• 申請(qǐng)日: 2016-05-23
• 公開（公告）號(hào): CN106610430A
• 公開（公告）日: 2017-05-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李翀;李書成;林開栗;張勇;康星;楊文杰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津億美諾生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/574
• 分類號(hào): G01N33/574;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫分析領(lǐng)域，具體地涉及一種基于化學(xué)發(fā)光法檢測MUC-16含量的試劑盒。

背景技術(shù)

膀胱惡性腫瘤又稱膀胱癌，是發(fā)病率僅次于子宮頸癌和子宮體癌而列居第三位的疾病。但因膀胱癌致死者卻占各類腫瘤的首位，對(duì)生命造成嚴(yán)重威脅。近幾年來，對(duì)宮頸癌及宮體癌的防治，取得了一定的成效，而有關(guān)膀胱癌的防治方面收效相對(duì)較小。因此，在膀胱癌是造成死亡原因最高的一種腫瘤。造成其病死率居高不下的原因是由于膀胱惡性腫瘤生長部位隱蔽，無法直接看到，早期膀胱惡性腫瘤癥狀不明顯，仍缺乏簡便實(shí)用的診斷方法。

近年來血清MUC-16(上皮性膀胱癌的單克隆抗體)、CA19-9(結(jié)腸、直腸癌的單克隆抗體)已被用于監(jiān)測膀胱癌病人。膀胱癌病人血清MUC-16高達(dá)100U/ml以上(正常在35U/ml以下)者占71％，CA19-9高達(dá)100U/ml以上(正常在37U/ml以下)者占30％。但這兩個(gè)指標(biāo)的診斷精確性和靈敏度均不高，目前，尚未發(fā)現(xiàn)一個(gè)能夠?qū)崿F(xiàn)膀胱癌診斷精確性和特異性較高的生物標(biāo)記物。因此急需發(fā)明一種新的診斷工具來提高膀胱癌的診斷精確度。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種基于化學(xué)發(fā)光法檢測MUC-16含量的試劑盒，該檢測試劑盒的檢測具有簡便、快速、靈敏度高、線性范圍寬和穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：化學(xué)發(fā)光法檢測MUC-16含量的試劑盒包括抗異硫氰酸熒光素多克隆抗體包被的磁微粒、異硫氰酸熒光素標(biāo)記的MUC-16單克隆抗體、堿性磷酸酶標(biāo)記的MUC-16單克隆抗體、堿性磷酸酶催化發(fā)光的化學(xué)發(fā)光底物液、稀釋液、清洗液、MUC-16系列校準(zhǔn)品，其中，本發(fā)明的試劑盒的反應(yīng)試管的材料選自透明的聚苯乙烯、聚乙烯和聚丙烯中的至少一種。

優(yōu)選地，所述的抗異硫氰酸熒光素多克隆抗體包被的磁微粒由羧基修飾的磁微粒表面共價(jià)結(jié)合抗異硫氰酸熒光素多克隆抗體制備得到，其中，所述的磁微粒粒徑為0.7～3μm，內(nèi)核為四氧化三鐵表面包裹有羧基基團(tuán)。在實(shí)際的免疫檢測中，由于待測樣品中所含的雜質(zhì)成分較多，一定程度上影響了檢測靈敏度和準(zhǔn)確性，所以從復(fù)雜的待測樣品基質(zhì)中快速分離、純化出目的待測物是臨床檢驗(yàn)工作者面臨的難題之一。磁微粒免疫檢測技術(shù)是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒作載體，以物理吸附、化學(xué)偶聯(lián)等方法包被上具有特異性親和力的抗體或抗原等各種免疫活性物質(zhì)，具有分離速度快、效率高、可重復(fù)性好、操作簡單、不影響被分離細(xì)胞或其他生物材料的生物學(xué)性狀和功能等特點(diǎn)，在外加磁場作用下可定向運(yùn)動(dòng)，使得某些特殊成分得以分離、濃集或純化。

優(yōu)選地，所述的抗異硫氰酸熒光素多克隆抗體包被的磁微粒懸浮于所述稀釋液中，配制成0.5～2μg/mL的磁微粒溶液；所述異硫氰酸熒光素標(biāo)記的MUC-16單克隆抗體溶解在所述稀釋液中，分別配制成0.25～0.5μg/mL異硫氰酸熒光素標(biāo)記的MUC-16單克隆抗體溶液；所述堿性磷酸酶標(biāo)記的MUC-16單克隆抗體溶解在所述稀釋液中，分別配制成0.25～0.5μg/mL堿性磷酸酶標(biāo)記的MUC-16單克隆抗體溶液。

優(yōu)選地，所述的異硫氰酸熒光素標(biāo)記的MUC-16單克隆抗體溶液通過透析法制備得到。

所述的堿性磷酸酶標(biāo)記的MUC-16單克隆抗體通過分別活化MUC-16單克隆抗體、堿性磷酸酶溶液后，將活化后的MUC-16單克隆抗體與活化后的堿性磷酸酶溶液混合后得到。

優(yōu)選地，所述的化學(xué)發(fā)光底物液為0.1～0.3M、pH值為8～10的Tris-HCl緩沖液，所述Tris-HCl緩沖液含有0.2～0.4mg/mL的二氧雜環(huán)乙烷，更優(yōu)選地，所述Tris-HCl緩沖液含有0.3mg/mL的二氧雜環(huán)乙烷。

所述的稀釋液為0.05～0.5M、pH值為7.0～8.0的Tris-HCl緩沖液且所述稀釋液含0.4～0.6wt％的牛血清白蛋白BSA和0.05～0.3wt％的疊氮化鈉；所述的清洗液為0.1～0.2M、pH值為8～9的Tris-HCl緩沖液，所述Tris-HCl緩沖液含有0.01～0.04wt％的吐溫20和15～20wt％的氯化鈉，更優(yōu)選地，所述的清洗液為0.1M、pH值為8Tris-HCl緩沖液中加入質(zhì)量百分比為0.02％的吐溫20和15％的氯化鈉。

所述的MUC-16系列校準(zhǔn)品的濃度范圍為0～50ng/mL。

本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明提供的試劑盒結(jié)構(gòu)簡便，使用方便，靈敏度高，特異性強(qiáng)，檢測范圍寬，操作簡單，試劑盒成本低，無放射性污染，臨床適用性強(qiáng)，更適用于我國臨床檢測，適合在國內(nèi)的各級(jí)醫(yī)院推廣使用。

具體實(shí)施方式