[發(fā)明專利]一種動物皮脫細胞基質(zhì)敷料的制備方法以及所得的敷料

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610341204.0
• 申請日: 2016-05-20
• 公開（公告）號: CN107397972A
• 公開（公告）日: 2017-11-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張國強;柳軼男;楊新廣;董驤
• 申請（專利權(quán)）人: 北京納通科技集團有限公司
• 主分類號: A61L15/40
• 分類號: A61L15/40;A61L15/42
• 代理公司: 北京律智知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11438
• 代理人: 王瑩,于寶慶

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)用材料領(lǐng)域，具體涉及一種動物皮脫細胞基質(zhì)敷料的制備方法以及所得的脫細胞基質(zhì)敷料。

背景技術(shù)

諸如燒傷、創(chuàng)傷、褥瘡、糖尿病足、下肢潰瘍等慢性傷口的愈合與創(chuàng)面修復(fù)一直以來是臨床面臨的重大難題。目前市場常用的高端濕性敷料有水膠體、藻酸鹽型填充敷料等。水膠體敷料的缺點在于不適用于滲出液較多的傷口以及有死腔或潛行深度的傷口；藻酸鹽型填充敷料的缺點是不適用于干燥結(jié)痂傷口。

良好的創(chuàng)面覆蓋物可以營造適宜組織修復(fù)的微環(huán)境。因此，近些年研究者一直在尋求一種更優(yōu)良的創(chuàng)面敷料。1985年，Heck等在The Journal of Trauma上報道應(yīng)用異體真皮作為自體表皮的真皮支架，兩者復(fù)合后移植于燒傷切痂創(chuàng)面，獲得了良好的創(chuàng)面修復(fù)的效果，并有效抑制瘢痕增生。1995年，Livesey等首先報道了脫細胞真皮基質(zhì)的制備方法。以往常見的脫細胞方法主要有化學(xué)法(如堿法、高低滲法)，去垢劑法(如離子去垢劑、非離子去垢劑、兩性離子去垢劑)，生物學(xué)方法-酶法(如核酸酶、胰酶、中性蛋白酶)，溶劑法(如醇類、丙酮、TBP)，物理學(xué)及其他方法(如壓力、電穿孔、灌注法、組織梯度壓力、超臨界流體、攪拌)。通常的制備方法包括采用胰蛋白酶和EDTA去表皮、TritonX 100(中性蛋白酶/曲拉通)和高滲鹽水或十二烷基硫酸鈉(SDS)脫細胞、戊二醛交聯(lián)等。脫細胞真皮基質(zhì)敷料去除了表皮和細胞成分，保留了細胞外基質(zhì)的彈性纖維與膠原網(wǎng)狀支架，免疫原性大大降低，成纖維細胞順著真皮基質(zhì)的規(guī)則結(jié)構(gòu)進行重建，避免了纖維混亂無序的排列，因而避免了瘢痕的形成。

已有的脫細胞真皮基質(zhì)敷料主要存在以下問題：去抗原不徹底，移植后易產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)；DNA/RNA的去除沒有引起足夠重視；處理過度，過多的采用生物試劑與有機試劑對脫細胞真皮基質(zhì)的膠原纖維結(jié)構(gòu)與性能產(chǎn) 生不良影響。

中國專利CN 103520773B公開了一種用于皮膚移植的脫細胞真皮材料，通過反復(fù)凍融處理以脫除細胞，降低真皮的免疫原性。研究發(fā)現(xiàn)，凍融技術(shù)僅能將細胞破碎，并不能有效脫除。由此可見，細胞脫除問題，目前仍是制約脫細胞真皮基質(zhì)應(yīng)用的重要課題。

發(fā)明內(nèi)容

為克服現(xiàn)有脫細胞真皮基質(zhì)在制備以及應(yīng)用中存在的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種動物皮脫細胞基質(zhì)敷料的制備方法。

本發(fā)明的另一目的是提供一種動物皮脫細胞基質(zhì)敷料。

本發(fā)明提供的動物皮脫細胞基質(zhì)敷料的制備方法包括將動物皮的斷層皮片經(jīng)過病毒滅活步驟、脫脂步驟、脫毛步驟以及脫細胞步驟制得，其中，所述脫細胞步驟包括多次凍融步驟以及所述多次凍融步驟之后的脫細胞溶液脫細胞步驟，其中，所述凍融步驟中，冷凍溫度為-70℃～-90℃，冷凍時間為5～15小時；所述脫細胞溶液脫細胞步驟中，所述脫細胞溶液包含質(zhì)量濃度為0.01％～0.2％的胰酶、質(zhì)量濃度為0.1％～1.0％的硫酸銨以及質(zhì)量濃度為0.01％～0.2％的脫脂劑，所述斷層皮片與所述脫細胞溶液的質(zhì)量比為1:6～1:10。

本發(fā)明提供的制備方法中，所述脫細胞溶液包含質(zhì)量濃度為0.01％～0.09％的胰酶、質(zhì)量濃度為0.5％～1.0％的硫酸銨以及質(zhì)量濃度為0.05％～0.15％的脫脂劑。所述斷層皮片浸泡于所述脫細胞溶液中10～60分鐘。

本發(fā)明提供的制備方法中，所述脫脂劑選自平平加、Triton X-100、十二烷基氨基丙酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚中的一種。

本發(fā)明提供的制備方法中，所述多次凍融步驟于所述病毒滅活步驟之前進行，或穿插于所述病毒滅活步驟、脫脂步驟、脫毛步驟之間進行。

本發(fā)明提供的制備方法中，所述病毒滅活步驟為將所述斷層皮片置于病毒滅活溶液中浸泡10～60分鐘，所述斷層皮片與所述病毒滅活溶液的質(zhì)量比為1:6～1:10，所述病毒滅活溶液包含質(zhì)量濃度為0.01％～0.2％的過氧乙酸和質(zhì)量濃度為0.1％～1.0％的氯化鈉，優(yōu)選地，所述病毒滅活溶液包含質(zhì)量濃度為0.01％～0.07％的過氧乙酸和質(zhì)量濃度為 0.1％～0.5％的氯化鈉。