[發明專利]一種臍血間充質干細胞的培養基及其培養方法有效

申請號：	201610338848.4	申請日：	2016-05-20
公開（公告）號：	CN105779388B	公開（公告）日：	2019-05-10
發明（設計）人：	葛嘯虎;陳海佳;王一飛;馬巖巖	申請（專利權）人：	廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司
主分類號：	C12N5/0775	分類號：	C12N5/0775
代理公司：	北京集佳知識產權代理有限公司 11227	代理人：	趙青朵
地址：	510000 廣東省廣州市廣州開發區***	國省代碼：	廣東;44
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種臍血間充質干細胞培養基及其培養方法
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【說明書】：

本發明涉及細胞培養技術領域，特別涉及一種臍血間充質干細胞的培養基及其培養方法。該培養基包括PRP、黃芪多糖和無血清培養基。本發明提供的培養基可顯著提高臍血間充質干細胞的增殖效率；在促進細胞增殖的同時，還可維持臍血間充質干細胞的表型和特性；可減少動物血清應用的風險和免疫原性，安全性好。

技術領域

本發明涉及細胞培養技術領域，特別涉及一種臍血間充質干細胞的培養基及其培養方法。

背景技術

間充質干細胞(MSCs)是具有多潛能的成體干細胞，普遍存在于不同組織，主要存在于結締組織和器官間質中，以骨髓組織中含量最為豐富，可刺激組織生長和修復，增強組織的再生能力。臍帶血中存在與骨髓間充質干細胞、脂肪間充質干細胞相似的細胞群，具有在特定誘導條件下可向多種細胞分化的能力，如向成骨分化和成脂分化。人臍帶血間充質干細胞已經在糖尿病、神經疾病、心臟病等動物模型中應用。由于臍帶血采集簡單、獲取成功率高、細菌和病毒感染風險低、免疫原性低等優點，在細胞治療和組織工程方面具有廣泛的應用前景。

將間充質干細胞應用于組織工程需要大量的種子細胞，但臍血來源的間充質干細胞較骨髓來源的少，存在培養成功率低、體內增殖率低等缺點。現在通常采用添加了生長所需因子的無血清培養基、利用胎牛血清或臍帶血清作為培養用血清培養臍血間充質干細胞。無血清培養體系雖能保證細胞批次的穩定性，但無法解決異種蛋白內在化問題；胎牛血清則存在異體血清排斥反應，生物危險性高，難以防止人與其他物種間病毒的感染和傳播。臍帶血清含有多種臍帶間充質干細胞生長所需蛋白，如粒細胞刺激因子、單核細胞刺激因子、白細胞介素6及腫瘤壞死因子等，促進造血細胞的增殖、體外生長和擴增。但由于臍帶血來源和保存的特殊性，而限制了其應用。有報道利用成人自體血清作為血清替代物培養臍帶間充質干細胞；但其培養效率比臍帶血清低。

因此，需要提供一種增殖效率高、安全性好的臍血間充質干細胞的培養基及其培養方法。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種臍血間充質干細胞的培養基及其培養方法。該培養基可顯著提高增殖效率，且安全性好。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種臍血間充質干細胞的培養基，包括PRP、黃芪多糖和無血清培養基。

PRP(Platelet Rich Plasma)是富含血小板、血漿或富含生長因子的血液。PRP技術是指利用自身的血液，提取出富含高濃度血小板和各種自身生長因子的血漿。

黃芪多糖是豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根經提取、濃縮、純化而成的水溶性雜多糖，淡黃色，粉末細膩，均勻無雜質，具引濕性。黃芪多糖由己糖醛酸、葡萄糖、果糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸等組成，可作為免疫促進劑或調節劑，同時具有抗病毒、抗腫瘤、抗衰老、抗輻射、抗應激、抗氧化等作用。

本發明將PRP、黃芪多糖與無血清培養基組合而成的培養體系可顯著提高臍血間充質干細胞增殖的能力。

作為優選，培養基中各組分的用量為：

PRP的體積百分含量為：5％～10％；

黃芪多糖：0.1～1mg/mL；

無血清培養基：補足。