[發明專利]一種檢測廣譜支原體的LAMP引物組、試劑盒及其應用有效
| 申請號： | 201610325986.9 | 申請日： | 2016-05-16 |
| 公開（公告）號： | CN105755161A | 公開（公告）日： | 2016-07-13 |
| 發明（設計）人： | 曹振 | 申請（專利權）人： | 翌圣生物科技（上海）有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/35 |
| 代理公司： | 上海旭誠知識產權代理有限公司 31220 | 代理人： | 鄭立 |
| 地址： | 201203 上海市浦東新*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 廣譜 支原體 lamp 引物 試劑盒 及其 應用 | ||
1.一種檢測廣譜支原體的LAMP引物組，其特征在于，所述LAMP引物組由外引物F3、外引物B3、內引物FIP、內引物BIP、環引物LF和環引物LB組成，所述外引物F3如SEQIDNO.1所示，所述外引物B3如SEQIDNO.2所示，所述內引物FIP如SEQIDNO.3所示，所述內引物BIP如SEQIDNO.4所示，所述環引物LF如SEQIDNO.5所示，所述環引物LB如SEQIDNO.6所示。
2.根據權利要求1所述的LAMP引物組，其特征在于，所述外引物F3、所述外引物B3、所述內引物FIP、所述內引物BIP、所述環引物LF和所述環引物LB的摩爾比為1:1:8:8:2:2。
3.含有根據權利要求1或2所述的LAMP引物組的支原體可視化檢測試劑盒。
4.根據權利要求3所述的支原體可視化檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括變色指示劑、BstDNA聚合酶、dNTPs、甜菜堿、等溫擴增緩沖液和MgSO4。
5.根據權利要求4所述的支原體可視化檢測試劑盒，其特征在于，所述變色指示劑為羥基萘酚藍。
6.根據權利要求3所述的支原體可視化檢測試劑盒，其特征在于，所述外引物F3在所述支原體可視化檢測試劑盒的LAMP反應液中的終濃度為0.2μM，所述外引物B3在所述支原體可視化檢測試劑盒的LAMP反應液中的終濃度為0.2μM，所述內引物FIP在所述支原體可視化檢測試劑盒的LAMP反應液中的終濃度為1.6μM，所述內引物BIP在所述支原體可視化檢測試劑盒的LAMP反應液中的終濃度為1.6μM，所述環引物LF在所述支原體可視化檢測試劑盒的LAMP反應液中的終濃度為0.4μM，所述環引物LB在所述支原體可視化檢測試劑盒的LAMP反應液中的終濃度為0.4μM。
7.根據權利要求3所述的支原體可視化檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性模板。
8.根據權利要求7所述的支原體可視化檢測試劑盒，其特征在于，所述陽性模板為含有豬鼻支原體23srRNA5’端部分基因片段的質粒。
9.根據權利要求1所述的LAMP引物組或權利要求3所述的支原體可視化檢測試劑盒在檢測支原體污染中的應用。
10.根據權利要求1所述的LAMP引物組或權利要求3所述的支原體可視化檢測試劑盒在檢測支原體污染的細胞培養液中的應用，其特征在于，所述應用采用環介導等溫擴增，所述環介導等溫擴增的條件為60-62℃恒溫反應1h，90℃5min滅活，終止反應。
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