[發明專利]微生物發酵法高效生產L?色氨酸的方法

有效

• 申請號: 201610325135.4
• 申請日: 2016-05-17
• 公開（公告）號: CN105861587B
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 曹華杰;劉帥;李靜;岳貴龍;張孟濤
• 申請（專利權）人: 河南巨龍生物工程股份有限公司
• 主分類號: C12P13/22
• 分類號: C12P13/22;C12R1/19
• 代理公司: 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙)41120
• 代理人: 程茗

1.微生物發酵法生產L-色氨酸的方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）、培養成熟的菌種：先對種子培養罐進行空罐滅菌，向種子培養罐中加入液體種子培養基后再進行實罐滅菌；實罐滅菌結束后降溫冷卻；制備接種用菌液，然后進行接種，在以下條件下進行培養后得到成熟菌種：培養溫度34-36℃，pH6.8-7.2，溶氧＞25%，壓力0.03-0.08MPa，風量0.3VVM-2.0VVM；

（2）、發酵罐培養：先對發酵罐進行空罐滅菌，向發酵罐中加入液體發酵培養基后再進行實罐滅菌；實罐滅菌結束后降溫冷卻，然后將步驟（1）得到的成熟菌種接種至發酵罐內，在以下條件下進行培養以制取L-色氨酸：培養溫度34-36℃，pH采用補充液氨分段控制，0-18h7.0-7.2，18h-放罐6.4-6.8，溶氧分段控制，0-18h10-25%，18h-放罐15-40%，壓力0.03-0.08MPa，風量0.3VVM-2.0VVM，過程中殘糖控制0.01-0.5%；

所述菌種為大腸埃希氏菌JLTrp，其分類命名為大腸埃希氏菌（Escherichia coli）JLTrp，菌種保藏編號為CGMCC NO. 7.217；

步驟（1）中所述液體種子培養基中各成分及其質量百分比含量為：葡萄糖1.4-6.0%、酵母粉0.05-0.3%、(NH₄)₂HPO₄ 0.1-0.8%、KCl 0.05-0.3%、MgSO₄ 0.08-0.45%、(NH₄)₂SO₄ 0.06-0.24%、檸檬酸0.08-0.42%、 FeSO₄ 0.00014-0.00042%、MnSO₄ 0.00006-0.00036%、維生素B1 0.000065-0.00039%和生物素0.00001-0.00012%，其余為水；

步驟（2）中所述液體發酵培養基中各成分及其質量百分比含量為：葡萄糖1%、酵母粉0.1%、(NH₄)₂HPO₄ 0.12-0.8%、KCL 0.12-0.8%、MgSO₄ 0.05-0.5%、(NH₄)₂SO₄ 0.08-0.48%、檸檬酸0.05-0.5%、 FeSO₄ 0.001-0.1%、Na₂SO₄ 0.0005-0.006%、MnSO₄ 0.00015-0.0009%、CuSO₄ 0.00002-0.00018%、CoCl₂ 0.00014-0.00135%和ZnSO₄ 0.0001-0.0018%，其余為水。

2.如權利要求1所述微生物發酵法生產L-色氨酸的方法，其特征在于：所述空罐滅菌的具體操作為：罐體清洗干凈，檢查閥門及人孔后，開蒸汽進行空罐滅菌，滅菌壓力為0.11-0.12MPa，溫度121-123℃，時間為45-60min。

3.如權利要求1所述微生物發酵法生產L-色氨酸的方法，其特征在于：所述實罐滅菌的具體操作為：將種子培養罐或發酵罐的列管升溫至80℃后，開蒸汽進入罐內對培養基進行滅菌，滅菌壓力為0.11-0.12MPa，溫度121-123℃，時間為10-30min。

4.如權利要求1所述微生物發酵法生產L-色氨酸的方法，其特征在于：所述步驟（1）中接種的具體操作為：采用壓差法進行接種，調pH至6.9，溫度35℃，壓力0.06MPa，在火焰下旋開接種口防護蓋，并迅速將種瓶接種管連接與接種口，緩慢調節壓力至0.03 MPa ，接種結束后，在火焰下拔下接種罐，并迅速將接種口防護蓋旋在接種口上。

5.如權利要求1所述微生物發酵法生產L-色氨酸的方法，其特征在于：所述步驟（2）中接種的具體操作為：調pH至6.9，溫度35℃，壓力0.06MPa，將種子罐內培養成熟的種子液壓入發酵罐內。

6.如權利要求1所述微生物發酵法生產L-色氨酸的方法，其特征在于：所述步驟（1）中接種用菌液的制備方法為：取瓶內菌種生長飽滿的茄型瓶，在火焰保護下向茄型瓶內注入生理鹽水50ml，并用接種環或者玻璃刮刀將表面菌種刮落入生理鹽水中，然后將含有菌種的生理鹽水在無菌操作下轉移到接種瓶內。