[發明專利]一種低血清培養豬肺炎支原體培養基及其制備方法和應用

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• 申請號: 201610320680.4
• 申請日: 2016-05-16
• 公開（公告）號: CN105779362A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 朱燕鋒;羅意;盧業云;許俊才
• 申請（專利權）人: 南京大爻網絡科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/35
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 唐循文

1.一種低血清培養豬肺炎支原體培養基，由基礎培養基和輔助培養基組成，其中基礎培養基包括MEM3-4g、酵母粉1-2g、葡萄糖3-4g、蛋白胨6-8g、0.5wt.%酚紅溶液1-2mL、氯化鈉1-2g、Na₂HPO₄·12H₂O0.5-1.0g、KH₂PO₄0.1-0.2g、去離子水400-600mL；輔助培養基包括酵母浸出汁30-60mL，20wt.%L-精氨酸溶液0.5-1mL，3wt.%谷氨酰胺溶液40-50mL，青霉素終濃度為100-300U/mL，滅活的豬血清40-100mL；其特征在于所述基礎培養基還含有氯化鉀0.1-0.5g；所述輔助培養基還含有0.01g/mL膽固醇甘油溶液5-10mL、10wt.%甘氨酸溶液0.5-1mL，10wt.%L-半胱氨酸溶液1-2mL；最后，將配置好的基礎培養基和輔助培養基混合，并用1mol/L氫氧化鈉溶液調整pH值至7.4-7.6。

2.根據權利要求1所述的一種低血清培養豬肺炎支原體培養基，其特征在于以整體計每400mL培養基中加滅活的豬血清不高于40mL，即整體培養基中血清添加的體積比例小于10%。

3.根據權利要求1所述的一種低血清培養豬肺炎支原體培養基，其特征在于所述0.01g/mL膽固醇甘油溶液的制備方法為：用0.1-0.5g膽固醇溶于10-50mL甘油內，并在116℃滅菌30min，冷卻至37℃。

4.根據權利要求1~3任一所述低血清培養豬肺炎支原體培養基的制備方法，其特征在于按照下列步驟進行：

a、制備基礎培養基：將基礎培養基的所有成分，攪拌均勻混合，全部溶解，在116℃滅菌30min，待冷卻后備用；

b、制備輔助培養基：將輔助培養基的成分過濾除菌，混合攪拌，既得輔助培養基；

c、將高壓冷卻滅菌好的基礎培養基和輔助培養基混合，用過濾除菌的1mol/LNaOH調節pH值7.4-7.6，分裝備用。

5.權利要求1~3任一所述培養基在培養豬肺炎支原體中的應用。