[發明專利]一種植物細胞規模培養方法

在審

• 申請號: 201610305789.0
• 申請日: 2016-05-10
• 公開（公告）號: CN107354123A
• 公開（公告）日: 2017-11-17
• 發明（設計）人: 張杰
• 申請（專利權）人: 張杰
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;C12N5/02
• 代理公司: 南京艾普利德知識產權代理事務所(特殊普通合伙)32297
• 代理人: 陸明耀

1.一種體外規模化懸浮培養擴增植物細胞的方法，其培養過程是：將植物愈傷組織使用常規方法進行擴增培養，得到擴增后的愈傷組織或胚狀體，將愈傷組織或胚狀體組織進行勻漿酶解、研磨或噴霧等理化手段分解為單細胞懸液，將細胞種子按一定接種比例接種到生物反應器中，通過調節氧含量在30-50％之間，pH為5-7，固定光源光照10-20h，光照強度2000-8000Lx，培養分階段進行，每一階段為10-25天，不同階段的光質交替變換，所述的光質為紅藍光，所述的交替變換為紅藍光比例由第一階段的2-3:4-5調整為第二階段的3-4:4-6，再由第二階段的3-4:4-6調整為第三階段的2-3:4-5，并以此模式循環；每階段更換新鮮液體培養基一次。每15-25天收獲植物細胞系培養物的30-50％，并補充相應比例的新鮮液體培養基，培養持續進行；所述液體培養基為基本培養基中添加植物生長調節劑，植物生長調節劑為生長素、細胞分裂素的組合或生長素、細胞分裂素與ABA的組合，生長素與細胞分裂素比例控制在3:1，總濃度在0.05-5mg/L調整。

2.根據權利要求1所述的方法，所述基本培養基為MS、1/2MS、1/4MS、B5、N6、NLN、White或SH培養基。

3.根據權利要求1所述的方法，所述的液體培養基與更換的新鮮液體培養基中的植物生長調節劑相同，均為IAA/NAA/IBA 0.05-3mg/L:6-BA/KT/ZT0.05-3mg/L，總濃度為0.05-5mg/L。

4.根據權利要求1所述的方法，優選的，更換的新鮮液體培養基中植物生長調節劑為IAA/NAA/IBA 0.05-3mg/L:KT 0.05-3mg/L:ABA 0.05-50ug/L，總濃度為0.05-5mg/L。

5.一種提高植物細胞系產量的體外規模化懸浮培養擴增植物細胞系方法，其特征在于：培養過程是將細胞系種子按一定接種比例接種到生物反應器中，通過調節氧含量在30-50％之間，酸堿度在5-7之間，固定光源光照10-20h，光照強度2000-8000Lx，培養分階段進行，每一階段為10-25天，不同階段的光質交替變換，所述的光質為紅藍光，所述的交替變換為紅藍光比例由第一階段的2-3:4-5調整為第二階段的3-4:4-6，再由第二階段的3-4:4-6調整為第三階段的2-3:4-5，并以此模式循環；每階段更換培養基一次。每15-25天收獲植物細胞系培養物的30-50％，并補充相應比例的新鮮培養液，培養周期結束后將培養物全部收獲；所述培養基中添加適當的植物生長調節劑，植物生長調節劑為生長素、細胞分裂素的組合或生長素、細胞分裂素與ABA的組合，生長素與細胞分裂素比例控制在3:1，總濃度在0.05-5mg/L調整。

6.根據權利要求5所述的方法，所述基本培養基為MS、1/2MS、1/4MS、B5、N6、NLN、White或SH培養基。

7.根據權利要求5所述的方法，所述的液體培養基與更換的新鮮液體培養基中的植物生長調節劑相同，均為IAA/NAA/IBA 0.05-3mg/L:6-BA/KT/ZT 0.05-3mg/L，總濃度為0.05-5mg/L。

8.根據權利要求5所述的方法，優選的，更換的新鮮液體培養基中植物生長調節劑為IAA/NAA/IBA 0.05-3mg/L:KT 0.05-3mg/L:ABA 0.05-50ug/L，總濃度為0.05-5mg/L。

9.根據權利要求5所述的方法，其特征是細胞系放置在液氮保種。