[發明專利]一種豬細環病毒1型環介導等溫擴增試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201610259272.2
• 申請日: 2016-04-25
• 公開（公告）號: CN105779655A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 何穎;陳忠偉;趙武;秦毅斌;盧冰霞;李斌;段群棚;周英寧;梁家幸;楊思儀;蔣冬福;蘇乾蓮
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 廣州市紅荔專利代理有限公司 44214
• 代理人: 李彥孚;何承鑫

1.一種豬細環病毒1型環介導等溫擴增試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括LAMP引物， 其引物包括外引物F3（SEQIDNO：1）與B3（SEQIDNO：2）、內引物FIP（SEQIDNO：3）與BIP （SEQIDNO：4）和環引物LF（SEQIDNO：5）與LB（SEQIDNO：6）；

其中引物的序列分別為：

F3AAGACCCCGCCAAGGTAC

B3CACTGCTCGTGCTTGAGAT

FIPTGTGGGGAGTTCGAGCAGTCTTCAGTCCTCAACCCTTGGGA

BIPGGAGGAGACGGAGAAGGCGTGCTCTCTTCGTCGGAGTCT

LFGTTCTAACAATCCTGTCACAGTCAT

LBACCCACTCCTTGGACAAAAGA。

2.根據權利要求1所述的豬細環病毒1型環介導等溫擴增試劑盒，其特征在于，所述的 試劑盒還包括2×反應緩沖液、BstDNA聚合酶、熒光目視檢測試劑、超純水和豬細環病毒1 型DNA模板；所述的2×反應緩沖液包括Tris-HCL、KCL、MgSO₄、(NH₄)₂SO₄、Tween20、Betaine 和dNTPs。

3.根據權利要求2所述的豬細環病毒1型環介導等溫擴增試劑盒，其特征在于，所述的 熒光目視檢測試劑采用鈣黃綠素熒光試劑，熒光試劑在反應前加入。

4.根據權利要求2所述的豬細環病毒1型環介導等溫擴增試劑盒，其特征在于，所述的2 ×反應緩沖液包括Tris-HCL35-55mM、KCL10-30mM、MgSO₄15-28mM、(NH₄)₂SO₄18-28mM、 Tween200.5-1.5℅、Betaine1.3-3.5M和dNTPs2.4-4.8mM。

5.根據權利要求2所述的豬細環病毒1型環介導等溫擴增試劑盒的應用，其特征在于， 具體操作步驟包括：

（1）LAMP引物的設計與合成

（2）豬細環病毒1型DNA模板的提取

（3）LAMP反應體系建立

（4）LAMP檢測方法。

6.根據權利要求5所述的豬細環病毒1型環介導等溫擴增試劑盒的應用，其特征在于， 所述的LAMP反應體系建立以25μL計，

2×反應緩沖液12.5μL

BstDNA聚合酶1μL

FIP40pmol

BIP40pmol

F35pmol

B35pmol

LF20pmol

LP20pmol

豬細環病毒1型DNA2μL

超純水補足25μL。

7.根據權利要求5所述的豬細環病毒1型環介導等溫擴增試劑盒的應用，其特征在于， 所述的LAMP檢測方法是采用特異性檢測、敏感性檢測和熒光可視化檢測的方法。

8.根據權利要求5所述的豬細環病毒1型環介導等溫擴增試劑盒的應用，其特征在于， 所述的LAMP檢測方法采用實時濁度儀進行密閉全程監控。

9.根據權利要求5所述的豬細環病毒1型環介導等溫擴增試劑盒的應用，其特征在于， 所述的LAMP檢測方法反應溫度為63℃，反應在18-25分鐘出現擴增。