[發明專利]重組核酸片段RecCR010005及其檢測引物與應用有效
| 申請號： | 201610258699.0 | 申請日： | 2016-04-22 |
| 公開（公告）號： | CN107304427B | 公開（公告）日： | 2021-12-14 |
| 發明（設計）人： | 周發松;喻輝輝;張學堂;邱樹青;孔會利;雷昉;姚玥;李旭;潘麗;李菁;韋懿;陳光;何予卿;陳美容;張啟發 | 申請（專利權）人： | 中國種子集團有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/29 | 分類號： | C12N15/29;C12N15/11;C12N15/82;C12Q1/6895;A01H1/02;A01H1/04;A01H5/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 100045 北京市西*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 重組 核酸 片段 reccr010005 及其 檢測 引物 應用 | ||
1.具稻瘟病抗性的水稻植株的選育方法，其特征在于，步驟如下：
1)以‘深95B’為輪回親本，‘華3418B’為供體親本進行雜交，將輪回親本與供體植物進行雜交，將所得到的雜交種與輪回親本進行回交，獲得回交一代，利用正向選擇標記PiC11ID115a和負向選擇標記PiC11S122、PiC11S166對其進行抗稻瘟病基因組片段的單側同源重組片段篩選，并利用水稻全基因組育種芯片對其進行背景選擇；
2)選擇背景回復值超過75％的重組單株與輪回親本再次進行回交，獲得回交二代，利用正向選擇標記PiC11ID115a對其進行檢測，選擇含有抗稻瘟病基因組片段的重組單株，然后利用水稻全基因組育種芯片對其進行背景選擇；
3)選擇背景回復值超過87.5％的重組單株與輪回親本又一次進行回交，獲得回交三代，利用正向選擇標記PiC11ID115a和負向標記PiC11S122、PiC11S166對其進行抗稻瘟病基因組片段的另一側同源重組片段篩選，并利用水稻全基因組育種芯片對其進行背景選擇；
4)選擇導入片段小，且背景回復值超過93.75％的重組單株，將選中的重組單株自交一次，獲得自交種，利用正向選擇標記PiC11ID115a對其進行檢測，并利用水稻全基因組育種芯片對其進行背景選擇，最終獲得含抗稻瘟病基因組重組核酸片段純合且背景回復值超過99％的水稻植株；
擴增標記PiC11ID115a的引物對為：
正向引物：5’-CTCAGTGCCCTTTTCTTCCTCA-3’，
反向引物：5’-TCACAGCAAAGACCATACAACCAT-3’；
擴增標記PiC11S122的引物對為：
正向引物：5’-TACGACCGTGACATGTCCTT-3’，
反向引物：5’-ATTAACCACCATGCTCACCA-3’；以及
擴增標記PiC11S166的引物對為：
正向引物：5’-TTAGCCCCTCTCTCTCTCCA-3’，
反向引物：5’-GCCAGATCTAGCAGAGGTGA-3’；
所述水稻全基因組育種芯片為RICE60K。
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