[發明專利]重組核酸片段RecCR010315及其檢測引物與應用

有效

• 申請號: 201610258489.1
• 申請日: 2016-04-22
• 公開（公告）號: CN107304445B
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發明（設計）人: 周發松;喻輝輝;張學堂;邱樹青;張龍雨;雷昉;姚玥;李旭;潘麗;李菁;韋懿;陳光;何予卿;蔣建為;張啟發
• 申請（專利權）人: 中國種子集團有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11;A01H1/02;A01H1/04
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.具稻瘟病抗性的水稻植株的選育方法，其特征在于，步驟如下：

1）以‘岳恢9113’為輪回親本，‘華3418B’為供體親本進行雜交，將輪回親本與供體植物進行雜交，將所得到的雜交種與輪回親本進行回交，獲得回交一代，利用正向選擇標記Pi31和負向選擇標記Pi2ID01、Pi2ID05對其進行抗稻瘟病基因組片段的單側同源重組片段篩選，并利用水稻全基因組育種芯片對其進行背景選擇；

2）選擇背景回復值超過75%的重組單株與輪回親本再次進行回交，獲得回交二代，利用正向選擇標記Pi31對其進行檢測，選擇含有抗稻瘟病基因組片段的重組單株，然后利用水稻全基因組育種芯片對其進行背景選擇；

3）選擇背景回復值超過87.5%的重組單株與輪回親本又一次進行回交，獲得回交三代，利用正向選擇標記Pi31和負向標記Pi2ID01、Pi2ID05對其進行抗稻瘟病基因組片段的另一側同源重組片段篩選，并利用水稻全基因組育種芯片對其進行背景選擇；

4）選擇導入片段小，且背景回復值超過93.75%的重組單株，將選中的重組單株自交一次，獲得自交種，利用正向選擇標記Pi31對其進行檢測，并利用水稻全基因組育種芯片對其進行背景選擇，最終獲得含抗稻瘟病基因組重組核酸片段純合且背景回復值超過99%的水稻植株；

擴增標記Pi31的引物對為：

正向引物：5’-ATCCAAACCCGTTGTTGCAC-3’，

反向引物：5’-CGGCAATTGCCACGATGATA-3’；

擴增標記Pi2ID01的引物對為：

正向引物：5’-CGTAAACTTGTTAGGTGGGTG-3’，

反向引物：5’-AAAATATGAGGAACTGGGCA-3’；以及

擴增標記Pi2ID05的引物對為：

正向引物：5’-CCTTATCACAGCCACATAGAGC-3’，

反向引物：5’-TGGGATTCATTGGGTGAGTAT-3’；

所述水稻全基因組育種芯片為RICE60K。