[發明專利]一種含有D-海藻糖的人類精子冷凍保護劑及其制備方法有效
| 申請號： | 201610252243.3 | 申請日： | 2016-04-21 |
| 公開（公告）號： | CN105746494B | 公開（公告）日： | 2018-05-25 |
| 發明（設計）人： | 宋春英;郭興萍;史雅萍;王慧芳;寧偉霞;王靜;鄧佳佳;袁亞男;李曉蓉;邢麗俊 | 申請（專利權）人： | 山西省人口計生委科學研究所 |
| 主分類號： | A01N1/02 | 分類號： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 山西五維專利事務所(有限公司) 14105 | 代理人： | 雷立康 |
| 地址： | 030006 山*** | 國省代碼： | 山西;14 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 冷凍保護劑 人類精子 海藻糖 制備 檸檬酸三鈉二水合物 葡萄糖 甘油 甘氨酸 放入 過濾器 精子活動力 存活試驗 雞蛋卵黃 去離子水 無菌檢測 混合液 水浴箱 檢測 試管 孵育 精子 卵黃 慢速 水中 離子 過濾 復蘇 保存 | ||
1.一種含有D-海藻糖的人類精子冷凍保護劑，其特征在于：每100ml的人類精子冷凍保護劑中含有下列組分的物質：
葡萄糖1.5-1.6g、檸檬酸三鈉二水合物1.3g、甘氨酸1.3g、甘油20ml、雞蛋卵黃20ml、D—海藻糖2.0-2.5g和去離子水60ml。
2.一種制備權利要求1所述的含有D-海藻糖的人類精子冷凍保護劑的方法，其特征在于：它包括下列步驟：
1)在60ml的無菌去離子水中加入1.5-1.6g的葡萄糖、1.3g的檸檬酸三鈉二水合物和2.0-2.5g的D—海藻糖，制得含D—海藻糖的混合液；
2)在混合液中加入20ml的甘油，混合均勻后再加入1.3g的甘氨酸，攪勻；
3)上述步驟中的物質完全溶解后用0.22μm的細孔過濾器過濾；
4)在過濾后的溶液中加入20ml的新鮮雞蛋卵黃；
5)將加入雞蛋卵黃的溶液放入56℃的水浴箱中孵育40分鐘，并且每隔5分鐘攪拌一次；
6)孵育完成后，檢測溶液中的pH值，如果pH值超出6.8-7.2之間范圍，丟棄重新制備；若在6.8-7.2之間，用1N無菌NaOH溶液調pH值至7.2；
7)對pH值達到7.2的溶液細菌培養進行無菌檢測；
8)對無菌檢測后的溶液再進行精子存活試驗檢測；
9)把通過精子存活試驗檢測后的溶液分到5ml-10ml的試管中，并在–70℃下進行保存。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述雞蛋卵黃的提取方法為：新鮮雞蛋洗凈，蛋殼75％酒精擦拭，把蛋殼剝去，分離完整蛋黃，用注射器穿刺蛋黃膜抽取到蛋黃，一個雞蛋取5-7ml的蛋黃。
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