[發明專利]一種檢測禽和豬組織中哌嗪殘留的確證分析方法

有效

• 申請號: 201610246436.8
• 申請日: 2016-04-20
• 公開（公告）號: CN105954370B
• 公開（公告）日: 2018-01-09
• 發明（設計）人: 謝愷舟;劉亞楠;龐茂達;謝星;崔璐璐;王波;高強;張楊楊;張跟喜;戴國俊;卜仕金;王冉;王金玉
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 南京知識律師事務所32207
• 代理人: 盧亞麗

技術領域

本發明涉及獸藥殘留檢測領域，具體涉及一種檢測禽和豬組織中哌嗪殘留的確證分析方法。

背景技術

目前國內外對哌嗪的殘留檢測方法雖有不少報道，主要有重量分析法、比色法、非水滴定法、氣相色譜法、高效液相色譜法和(超)高效液相色譜-串聯質譜法等，但重量分析法、比色法和非水滴定法不適合生物樣品中哌嗪的檢測，靈敏度較低。在液相色譜上，哌嗪無發光基團，不能直接被紫外檢測器或熒光檢測器檢測，故常通過柱前衍生使哌嗪帶上特定基團，從而使檢測成為可能。而到目前為止，通過較為簡單的乙酸酐柱前衍生法檢測動物組織中哌嗪殘留的氣相色譜-串聯質譜法(GC-MS/MS)的研究國內、外均尚未見報道。

發明內容

為了能檢測并確證哌嗪在禽和豬組織中的殘留，滿足歐盟標準，本發明提供了一種氣相色譜-串聯質譜法(GC-MS/MS)，能快速、準確地檢測禽和豬組織中哌嗪的殘留。

本發明所采用的技術方案是：一種檢測禽和豬組織中哌嗪殘留的確證分析方法，是將組織樣品經過提取、凈化和柱前衍生化后，進行氣相色譜-串聯質譜法(GC-MS/MS)檢測。以高純氦氣(99.999％)為載氣，流速為1.0mL/min，程序升溫模式，不分流進樣，進樣體積：1.0μL。采用電子轟擊(EI)離子源，全掃描(SCAN)和選擇離子監測(SIM)方式定性，選擇反應監測(Auto SRM)方式定量。

所述的禽和豬組織樣品提取、凈化和衍生化具體內容是：將均質好的組織樣品，在研缽中與3.0g無水硫酸鈉研磨混勻吸收樣品水分，再加入3.0g左右硅藻土研磨至粉狀混勻，裝填入加速溶劑萃取儀22mL不銹鋼萃取池中，在80℃和1500psi壓力條件下靜態萃取5min，氮氣吹掃60s，每個萃取池萃取兩次，第一次使用正己烷，去脂用，收集液棄掉，第二次萃取液收集于60mL收集瓶，轉移至50mL離心管，即得提取液。

提取液過Strata-X-C固相萃取小柱，依次用3mL甲醇、3mL 2.0％甲酸水溶液將SPE小柱活化平衡，上樣后待提取液勻速流干后，再依次用3mL 0.1mol/L的鹽酸水溶液、3mL 0.1mol/L的鹽酸甲醇淋洗，待小柱干燥后，最終用2mL 5.0％氨水甲醇分兩次進行洗脫，收集洗脫液于2mL具塞離心管中。

將上述裝有凈化收集液的具塞離心管，置于離心濃縮儀中，40℃真空負壓濃縮至干，后加入1.0mL二氯甲烷溶解殘渣，渦旋混勻后，轉移至10mL玻璃小瓶，并加入50μL乙酸酐和100μL三乙胺，擰緊瓶蓋，于50℃溫度下衍生30min后取出，冷卻至室溫，衍生后液體并洗滌液轉移至2mL具塞離心管，渦旋振蕩使基質混勻，12000×g，常溫離心10min，將上層清液過0.22μm濾膜，濾液供GC-MS/MS測定分析。

本發明在回收率、精密度和靈敏度三個方面與其他檢測方法進行比較，本方法具有簡單、快速、準確和靈敏的優點。

附圖說明

圖1哌嗪衍生后產物(1,4-二乙酰基哌嗪)質譜圖。

圖2哌嗪標準工作曲線(n＝7)。

圖3空白雞組織(肌肉、肝臟、腎臟和皮膚+脂肪)樣品的總離子流圖(TIC)和定量離子的質量色譜圖(MC)。

圖4空白雞組織(肌肉、肝臟、腎臟和皮膚+脂肪)樣品添加100.00μg/kg標準品的混合總離子流圖(MIC)和定量離子總離子流圖(TIC)。

圖5空白鴨組織(肌肉、肝臟、腎臟和皮膚+脂肪)樣品的總離子流圖(TIC)和定量離子的質量色譜圖(MC)。

圖6空白鴨組織(肌肉、肝臟、腎臟和皮膚+脂肪)樣品添加100.00μg/kg標準品的混合總離子流圖(MIC)和定量離子總離子流圖(TIC)。

圖7空白鵝組織(肌肉、肝臟、腎臟和皮膚+脂肪)樣品的總離子流圖(TIC)和定量離子的質量色譜圖(MC)。

圖8空白鵝組織(肌肉、肝臟、腎臟和皮膚+脂肪)樣品添加100.00μg/kg標準品的混合總離子流圖(MIC)和定量離子總離子流圖(TIC)。

圖9空白豬組織(肌肉、肝臟、腎臟和皮膚+脂肪)樣品的總離子流圖(TIC)和定量離子的質量色譜圖(MC)。

圖10空白豬組織(肌肉、肝臟、腎臟和皮膚+脂肪)樣品添加100.00μg/kg標準品的混合總離子流圖(MIC)和定量離子總離子流圖(TIC)。

具體實施方式

在本發明中所使用的術語，除非有另外說明，一般具有本領域普通技術人員通常理解的含義。