[發(fā)明專利]一種基于α烯醇化酶的麻痹性貝類毒素細(xì)胞檢測法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201610231154.0 | 申請(qǐng)日： | 2016-04-14 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN105785002B | 公開（公告）日： | 2017-05-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 劉建軍;黃海燕;孫燁;劉威;任曉虎;彭朝瓊;黃新鳳 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 深圳市疾病預(yù)防控制中心 |
| 主分類號(hào)： | G01N33/573 | 分類號(hào)： | G01N33/573 |
| 代理公司： | 北京精金石專利代理事務(wù)所(普通合伙)11470 | 代理人： | 劉曄 |
| 地址： | 518055 *** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 基于 醇化 麻痹 貝類 毒素 細(xì)胞 檢測 | ||
1.一種基于α烯醇化酶的麻痹性貝類毒素細(xì)胞檢測法，其特征在于：包括如下步驟：
S1樣品的處理：稱取貝肉樣品，加酸溶液煮沸，冷卻后，離心取上清液，控制上清液的pH<4.0，得到樣品檢測液；
S2暴露細(xì)胞及蛋白樣品提取：將標(biāo)準(zhǔn)品或所述樣品檢測液使用無血清培養(yǎng)基稀釋后暴露小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤N2a細(xì)胞，暴露20～28h后，采用胰酶消化或細(xì)胞刮板收集細(xì)胞，洗滌后，離心收集細(xì)胞，加裂解液提取蛋白樣品；
S3檢測：使用α烯醇化酶ELISA試劑盒對(duì)所述蛋白樣品中α烯醇化酶的含量進(jìn)行檢測，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過OD值計(jì)算α烯醇化酶的含量并進(jìn)而得出麻痹性貝類毒素含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于α烯醇化酶的麻痹性貝類毒素細(xì)胞檢測法，其特征在于：所述步驟S1中，酸溶液為0.1mol/L HCl溶液，酸溶液與所述貝肉樣品的用量比為5～15mL：5～15g。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于α烯醇化酶的麻痹性貝類毒素細(xì)胞檢測法，其特征在于：所述步驟S2中，稀釋倍數(shù)為20～40倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于α烯醇化酶的麻痹性貝類毒素細(xì)胞檢測法，其特征在于：所述貝肉樣品經(jīng)消化腺去除和均質(zhì)處理。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于α烯醇化酶的麻痹性貝類毒素細(xì)胞檢測法，其特征在于：所述步驟S2中，暴露時(shí)間為24h。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于α烯醇化酶的麻痹性貝類毒素細(xì)胞檢測法，其特征在于：所述α烯醇化酶ELISA試劑盒購自上海心語生物科技有限公司。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于α烯醇化酶的麻痹性貝類毒素細(xì)胞檢測法，其特征在于：所述無血清培養(yǎng)基為DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于α烯醇化酶的麻痹性貝類毒素細(xì)胞檢測法，其特征在于：所述裂解液為Phospho Sate，購自美國Thermo Scientific公司。
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