[發明專利]一種基于動態三明治結構的電化學傳感器及其制備和應用

有效

• 申請號: 201610225995.0
• 申請日: 2016-04-13
• 公開（公告）號: CN105911289B
• 公開（公告）日: 2018-04-10
• 發明（設計）人: 李根喜;李超;馬潔樺;胡曉璐
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: C12Q1/527
• 分類號: C12Q1/527
• 代理公司: 南京知識律師事務所32207
• 代理人: 胡錫瑜

1.一種基于動態三明治結構的電化學傳感器，其特征是由電極、信號鏈、反應體系和電極檢測液組成，電極采用金電極，信號鏈為一段單鏈DNA，DNA鏈的5’端修飾有巰基，DNA鏈的3’端修飾有亞甲基藍，通過巰基與金電極表面自組裝形成金-巰鍵立于金電極表面，反應體系中含有DNA核酶DNAzyme與必須的反應緩沖體系，DNAzyme可以與信號鏈互補配對并將其切割成兩段DNA短鏈，DNAzyme上標記有靶蛋白識別元件，目標蛋白質結合后，由于蛋白質分子量較大，形成的蛋白質-核酶復合物在電極表面的擴散受到限制，嚴重遲滯了核酸酶對底物鏈的切割，使得MB的氧化電流增大，最后通過MB氧化電流的變化實現目標蛋白的分析,DNA信號鏈含有16個堿基，序列為5’-C6-SH-CTCACTATrAGGAAGAG-Methylene blue-3’，通過金-巰鍵固定于金電極表面，所述DNAzyme序列為5’-Digoxin-CTCTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTGAG-3’，通過Digoxin直接與目標蛋白結合，所述反應體系為10mM Tris-HCl，10nM DNAzyme，200mM NaCl，1mM ZnCl₂，pH 7.2，所述電極檢測液為10mM Tris-HCl，100mM NaCl，pH 7.4。

2.權利要求1所述一種基于動態三明治結構的電化學傳感器在定量檢測蛋白質或蛋白質間相互作用中的應用，其特征在于，采用三電極體系，參比電極為飽和甘汞電極，對電極為鉑絲電極，通過方波伏安法掃描MB氧化電流，掃描高電位為0.05V，低電位為-0.5V，頻率20Hz，電位增量0.004V，振幅0.025V；通過分析不同濃度目標蛋白標準液，以MB氧化電流增加的百分比與目標蛋白質的濃度繪制標準曲線，利用該標準曲線測得樣品中目標蛋白質的濃度。