[發明專利]一種根莖增重明顯的菘藍三倍體育種方法

在審

• 申請號: 201610224421.1
• 申請日: 2016-04-12
• 公開（公告）號: CN105660421A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發明（設計）人: 周常
• 申請（專利權）人: 周常
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H1/08
• 代理公司: 北京富天文博興知識產權代理事務所(普通合伙) 11272
• 代理人: 劉壽椿

1.一種根莖增重明顯的菘藍三倍體育種方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟I，種子萌發：精選菘藍種子，用消毒水清洗3次～5次，然后在 35℃～50℃熱水中浸泡1h～2h，撈出，移植到液體營養培養基中，在溫度 為25℃～30℃、培養基轉速為15r/min～30r/min的條件下進行暗培養，出芽 后，在溫度為28℃～33℃、光照強度為2500lx～3200lx的條件下每天光照 培養13h～16h，直至得到芽長為5mm～8mm的菘藍幼芽；

步驟II，重力場誘導：將經步驟I得到的菘藍幼芽移植到重力場中，進 行重力場誘變育種處理，連續誘導3天～5天，篩選根須茂盛、根莖增重明 顯的誘變菘藍幼苗，再移入MS培養基中，培養20天～30天，得到誘變菘 藍植株；

步驟III，定向繼代育種：將經步驟II篩選過的誘變菘藍植株移栽到大 田中，給予正常光照、水分及田間管理，使用人工自花授粉方式繁殖培育， 定向繼代育種3代～4代，選出根須茂盛、根莖增重明顯的植株，收集得到 菘藍種子；

步驟IV，多倍體誘導：步驟III收集得到的菘藍種子經步驟I所述的種子 萌發處理，得到菘藍幼芽，分為A、B兩組，對A組幼芽，使用γ射線源 進行輻照處理，并使用濃度為450mg/L～550mg/L的秋水仙堿溶液對A組 幼芽進行染色體加倍處理，并通過用流式細胞儀進行倍性分析，篩選出 2n＝28的四倍體幼芽；而B組則為不進行加倍處理的2n＝14的二倍體幼芽；

步驟V，移栽：將經步驟IV處理的A組幼芽和B組幼芽，分別移栽至 MS固體培養基中，給予正常光照和水分培養條件，待幼芽生根定型以后 按照組別分別移植到大田中正常生長，分別得到根須茂盛、根莖增重明顯 的A組四倍體植株和B組二倍體植株；

步驟VI，三倍體育種：將B組二倍體植株進行人工自花授粉，確保種 子性狀穩定延續，為保持系，以A組四倍體植株為母本，B組二倍體植株 為父本，使用人工異花授粉方式，進行有性雜交，即得根莖增重明顯的三 倍體菘藍種子。

2.根據權利要求1所述的育種方法，其特征在于，步驟I中，所述消毒水的成 分及其配比分別為：次氯酸鈉：二氧化氯＝5:1～1:1。

3.根據權利要求1所述的育種方法，其特征在于，步驟I中，所述液體營養培 養基的成分及濃度為：Co(NH₂)₂、300mg/L～500mg/L，K₂SO₄、 100mg/L～150mg/L，KNO₃、120mg/L～180mg/L，(NH₄)₂HPO₄、 150mg/L～250mg/L，CaCl₂、50mg/L～80mg/L，ZnSO₄、50mg/L～100mg/L， NaCl、15mg/L～50mg/L，MgCl₂、80mg/L～100mg/L，FeCl₂、20mg/L～50mg/L， Mg(BO₂)₂、180mg/L～300mg/L，維生素A、20mg/L～50mg/L，葉酸、 10mg/L～30mg/L，煙酰胺、50mg/L～150mg/L，維生素E、20mg/L～60mg/L， 苯丙酰胺、100mg/L～180mg/L，半胱氨酸、50mg/L～80mg/L，酪氨酸、 30mg/L～80mg/L，甘氨肽、100mg/L～300mg/L，亮氨酸、30mg/L～100mg/L， 乳糖、8000mg/L～10000mg/L，蔗糖、5000mg/L～8000mg/L，瓊脂、 10000mg/L～20000mg/L。