[發明專利]一種蛋白質免疫印跡膜再生液

有效

• 申請號: 201610220212.X
• 申請日: 2016-04-08
• 公開（公告）號: CN107271656B
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發明（設計）人: 于祥春;馮曉燕;林挺;王文利;龔建
• 申請（專利權）人: 北京愛普拜生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于分子生物學領域，主要涉及到一種蛋白質免疫印跡膜的再生液。此蛋白質免疫印跡膜再生液可以高效去除免疫印跡膜上的一抗和二抗，以便用于蛋白免疫印跡檢測中轉移了蛋白的同一張印跡膜的重復高效利用，可以非常方便地重新利用使用過的印跡膜檢測其它目的蛋白，省時省力，而且可以消除蛋白重新上樣而帶來的誤差，使可比性增強。經過多個抗體的檢測實驗，這種蛋白質免疫印跡膜再生液通常可以重復利用免疫印跡膜至少三次，大大節省了分子生物學常規實驗蛋白質免疫印跡檢測所消耗的相關費用，并且使用本試劑只需大約30分鐘即可實現蛋白免疫印跡膜的重復再使用。并與底物顯色法、化學發光顯色、熒光標記二抗的直接檢測法兼容。

技術領域

本發明涉及一種蛋白質免疫印跡膜再生液，此蛋白質免疫印跡膜再生液可以快速高效充分地去除蛋白質免疫印跡膜上結合的一抗和二抗，使蛋白免疫印跡膜可以重復循環使用。

背景技術

蛋白質組學(proteomics)是指以基因組編碼的所有蛋白質為研究對象，從細胞或組織整體水平上研究蛋白質的組成及其變化規律，從而深入認識有機體的各種生理和病理。與傳統蛋白質研究比較，蛋白質組學研究體現了全面性、整體性、高通量、大規模的特點。蛋白質組學的研究對于已完成基因組計劃的理論預測的蛋白質組進行實證分析具有無法替代的重要作用。蛋白質組學技術較為復雜，包括蛋白質分離、鑒定和信息分析三方面的內容。其中，目的蛋白質的分離鑒定是蛋白質組學的核心技術之一。免疫印跡，又稱蛋白質印跡(Western blot)，是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣本中的某種蛋白質的方法。免疫印跡方法首先是使用凝膠電泳分離天然或變性的蛋白質，然后將凝膠中的蛋白質用電印跡方法轉移到化學惰性的高分子轉移膜上，之后將目的蛋白的特異性一級抗體(一抗)與轉移膜上的目的蛋白識別并進行免疫結合反應，再用標記過的二級抗體(二抗)與一抗結合，之后用對二抗分子中標記物的檢測證明目的蛋白的存在及表達量的區別。抗體與抗原能夠特異性結合是基于抗原決定簇(表位)與抗體超變區的溝槽分子表面的結構互性與親合性而結合的。是抗原和對應抗體在一定條件下特異結合形成可逆性抗原一抗體復合物的過程。在蛋白印跡檢測過程中，除了檢測目的蛋白之外，還需要檢測TUBULIN、ACTIN等表達量相對穩定的蛋白質作為參照以確定蛋白質總上樣量的一致性。在通常的蛋白印跡檢測過程中，承載了蛋白的印跡膜一次只能做一次免疫印跡檢測，無法在同一張膜上同時再對內參蛋白進行檢測，如果要進行內參蛋白的檢測，只能再進行蛋白電泳轉膜等同樣的一系列蛋白免疫檢測操作，不僅費時費事，還會導致重復上樣及操作引起的印跡膜上蛋白狀態的改變。因此如果在同一張膜上既可以檢測目的蛋白的表達量變化狀況，又可以檢測TUBULIN、ACTIN等表達量相對穩定的參照蛋白或檢測其它另外蛋白的狀況是最理想的蛋白免疫印跡檢測。

本發明一種高效蛋白質免疫印跡膜再生液可以在第一次蛋白免疫印跡檢測操作全部完成后充分高效地去除結合在目的蛋白上的一抗和二抗，以此用于蛋白免疫印跡檢測中轉移了蛋白的同一張印跡膜的重復利用，可以非常簡單方便地再次使用印跡膜檢測其它目標蛋白，和重新進行SDS-PAGE電泳等蛋白免疫印跡操作程序相比，不僅省時省力，并且可以消除蛋白質重新上樣及電泳帶來的系統誤差，在同一張膜上進行內參蛋白與目的蛋白的檢測，從而可比性更強。本實用新型經過多個抗體的檢測實驗，通常可以重復利用印跡膜2～3次。而且使用本試劑盒只需大約30分鐘即可實現蛋白免疫印跡膜的重復使用。

參考文獻

張燕婉等蛋白質免疫印跡技術的實驗研究實驗技術與管理2008(10)

趙俊芳等免疫印跡法檢測過敏原特異性IgG現代檢驗醫學雜志2008(01)

發明內容

本發明目的之一是提供一種可以簡單高效充分去除蛋白質免疫印跡膜上結合的一抗和二抗的方法；

本發明目的之二是提供一種可以簡單高效充分去除蛋白質免疫印跡膜上結合的一抗和二抗的再生液；

本發明目的之三是提供一種能夠適用于NC膜及PVDF膜上結合的一抗和二抗的再生液；