[發(fā)明專利]一種快速高效提取哺乳動(dòng)物耳組織基因組DNA的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201610215547.2 | 申請(qǐng)日： | 2016-04-08 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN105647911B | 公開（公告）日： | 2020-09-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 楊巧麗;滾雙寶;馬艷萍 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N15/10 | 分類號(hào)： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 甘肅省知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)中心 62100 | 代理人： | 馬英 |
| 地址： | 730070 *** | 國省代碼： | 甘肅;62 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 快速 高效 提取 哺乳動(dòng)物 組織 基因組 dna 方法 | ||
1.一種快速高效提取哺乳動(dòng)物耳組織基因組DNA的方法，其特征在于：該方法的具體步驟如下：
1）組織破碎：取30 mg仔豬耳組織樣于滅菌離心管中，剪碎；快速加入300 μL充分預(yù)冷至-20℃的TE裂解液，反復(fù)顛倒滅菌離心管5 min，3000 rmp離心5 min、棄上清液；盡可能使細(xì)胞充分破碎制成溶漿并對(duì)溶漿中DNA進(jìn)行保護(hù)；所述TE裂解液的組成為：pH8.0的10mMTris-HCl 和pH8.0的2mM EDTA；
2）組織裂解液消化；該組織裂解液配置為：pH8.0的1M Tris-HCl 25 mL、0.5M EDTA100 mL、2M NaCl 25 mL、10% SDS 50 mL、加ddH2O定容至 500 mL，高壓滅菌；將該600 μL組織裂解液加入所述滅菌離心管中，緩慢顛倒混勻10 min；
3）Tris飽和酚抽提：加入600 μL Tris飽和酚，緩慢顛倒混勻10 min，12000 rpm離心10min，吸取上層清液；
4）重復(fù)步驟3）操作；
5）Tris飽和酚和氯仿異戊醇混合抽提：加入300 μL Tris飽和酚和300 μL體積比為24：1氯仿/異戊醇，緩慢顛倒混勻10 min，12000 rmp離心10 min，吸取上清液 ；
6）氯仿異戊醇抽提：加入600 μL體積比為24：1的氯仿/異戊醇，混勻10 min，12000 rpm離心10 min，吸取上清液 ；
7）醋酸鈉和 -20℃預(yù)冷的無水乙醇沉淀DNA：加入 60 μL 3 M NaAc 和在-20 ℃充分預(yù)冷的無水冰乙醇 1 mL，輕微搖晃至出現(xiàn)乳白色絲狀 DNA 沉淀，冰浴 15 min，12000 rmp離心10 min，棄上清液；
8）乙醇漂洗：加入1 mL 75% 乙醇漂洗，12000 rpm 離心2 min，棄上清液；
9）小心倒掉乙醇，將滅菌離心管倒扣于濾紙上，置于無菌操作臺(tái)，至乙醇揮發(fā)完全；
10）TE 緩沖液溶解DNA、保存：加入200 μL TE 緩沖液，4 ℃放置24 h使DNA完全溶解，瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測后 -20 ℃保存。
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