[發明專利]一種青海云杉成熟合子胚愈傷組織誘導的培養基及方法

有效

• 申請號: 201610212622.X
• 申請日: 2016-04-07
• 公開（公告）號: CN105850731B
• 公開（公告）日: 2018-01-09
• 發明（設計）人: 張瑩花;徐先英;賀訪印;王方琳
• 申請（專利權）人: 甘肅省治沙研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務所11569
• 代理人: 劉奇

技術領域

本發明涉及松科云杉屬植物體細胞胚胎發生研究領域，具體涉及一種青海云杉成熟合子胚愈傷組織的培養基及誘導方法。

背景技術

松杉類針葉植物是林業生產和造林實踐的重要樹種，但是采用常規無性繁殖技術難以生根，致使其優良基因型的利用受到制約。于是，人們嘗試通過體細胞胚胎發生技術實現針葉樹的快速繁育。1985年，Hakman等首次報道采用歐洲云杉(Picea abies)的未成熟合子胚成功誘導體細胞胚形成并獲得再生植株。此后，針葉樹體細胞胚的誘導、成熟和植株再生過程的研究取得了很大進展，國際上普遍認為體細胞胚胎發生是針葉樹良種基因型規?；瘮U繁的最佳途徑。

青海云杉(P.crassifolia)是我國青藏高原東北邊緣特有樹種，屬云杉屬常綠針葉喬木。主要分布于祁連山區、青海(都蘭以東、西傾山以北)、甘肅(河西走廊及靖遠、榆中、夏河、卓尼、舟曲)、寧夏(賀蘭山、六盤山)、內蒙古大青山海拔1600-3800米的地帶。其材質優良、抗旱性較強，為青海東部、甘肅北部山區和祁連山區的優良造林樹種，也是該地區森林演替的頂極群落和地帶性植被的建群種。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種采用青海云杉成熟合子胚誘導愈傷組織的培養基及方法。

為實現上述目的，本發明公開了如下技術方案：

一種青海云杉成熟合子胚愈傷組織誘導的培養基，該愈傷組織誘導培養基為S培養基+2,4-D 1mg·L^-1+6-BA 2mg·L^-1+KT 4mg·L^-1，該培養基含34g·L^-1蔗糖，8g·L^-1瓊脂，0.5g·L^-1水解酪蛋白，pH為5.8。

本發明的再一目的是公開一種青海云杉成熟合子胚愈傷組織的誘導方法，包括如下步驟：

(1)培養基配制：按S培養基配方配置基本培養基，然后添加1mg·L^-1的2,4-D、2mg·L^-1的6-BA、4mg·L^-1的KT和0.5g·L^-1的水解酪蛋白，以及34g·L^-1蔗糖和8g·L^-1瓊脂，pH為5.8，分裝滅菌后備用。

(2)外植體消毒：將青海云杉種子于水中浸泡10-15h后，用鑷子剝去種皮；然后，用75％酒精對去皮的種子進行表面消毒；再用0.1％HgCl₂對種子深度滅菌，然后用無菌水沖洗；最后，在無菌條件下，用無菌濾紙吸干種子表面水分。

(3)種胚分離：在無菌條件下，用消過毒的尖頭鑷子夾掉種子胚根段的尖端部分，然后用鑷子壓種子中部得到種胚；

(4)接種和培養：在無菌條件下，將種胚平行接種于培養基的表面，置于25℃條件下暗培養；

(5)愈傷組織的增殖：愈傷組織形成后，將之轉接于誘導培養基，進行增殖培養。

作為一種進一步的改進方案，所述步驟(2)中，將青海云杉種子于水中浸泡12h。

作為一種進一步的改進方案，所述步驟(2)中，用酒精對去皮的種子進行表面消毒的時間為5min。

作為一種進一步的改進方案，所述步驟(2)中，用無菌水沖洗5次，每次5min。

本發明公開的一種青海云杉成熟合子胚愈傷組織的培養基及誘導方法，具有以下有益效果：

本發明的誘導率達80％以上，此方法可為建立穩定的青海云杉體細胞胚發生體系奠定基礎，對相關科研、技術人員具有一定的參考作用。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明作進一步描述。

實施例1

一種青海云杉成熟合子胚愈傷組織誘導的培養基，該愈傷組織誘導培養基為S培養基+2,4-D 8mg·L^-1+6-BA 0.5mg·L^-1+KT 2mg·L^-1，該培養基含34g·L^-1蔗糖，8g·L^-1瓊脂，0.5g·L^-1水解酪蛋白，pH為5.8。該培養基愈傷組織誘導率平均為44.4％。

實施例2