[發(fā)明專(zhuān)利]固定化復(fù)合磷脂酶酶法脫膠工藝

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610211231.6
• 申請(qǐng)日: 2016-04-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107267282A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭宏濤;王劍英;賈佳
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 安徽綠微康生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C11B3/00
• 分類(lèi)號(hào): C11B3/00
• 代理公司: 深圳市萬(wàn)商天勤知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙)44279
• 代理人: 聶新華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及油脂酶法脫膠技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種運(yùn)用固定化復(fù)合磷脂酶對(duì)油脂進(jìn)行酶法脫膠的工藝。

背景技術(shù)

經(jīng)壓榨、浸出等方法從油料種子中提取的毛油含有蛋白質(zhì)、糖類(lèi)、磷脂、色素、金屬離子、游離脂肪酸等雜質(zhì)，通常不能直接食用，需要經(jīng)過(guò)一系列油脂精煉工序?qū)⑦@些不利于油脂品質(zhì)的雜質(zhì)去除，才能得到符合國(guó)家要求的食用油。毛油中所含的磷脂、蛋白質(zhì)和粘液質(zhì)等統(tǒng)稱(chēng)為膠質(zhì)，毛油中的膠質(zhì)以磷脂為主，故脫膠也稱(chēng)為脫磷。要滿足物理精煉的要求，必須在脫膠過(guò)程中將油脂的磷含量控制在10mg/kg以?xún)?nèi)，否則磷脂進(jìn)入脫臭塔后在高溫下易結(jié)焦，附著在設(shè)備內(nèi)壁，并且產(chǎn)生黑色物，影響精煉油的色澤。傳統(tǒng)的脫膠方法主要包括水化脫膠和酸法脫膠：水化脫膠只能除去毛油中的水化磷脂（HP），脫膠后油中磷含量約為 80~200 mg/kg，難以滿足物理精煉的要求；酸法脫膠主要是利用酸化作用將毛油中的非水化磷脂（NHP）轉(zhuǎn)化為HP，再通過(guò)加入適量水將磷脂去除。根據(jù)毛油品種和品質(zhì)的差異，經(jīng)過(guò)酸法脫膠之后，油中磷含量約為15~80 mg/kg，也難以滿足物理精煉的要求。

近年來(lái)，酶法脫膠技術(shù)因其在提高油脂工業(yè)的經(jīng)濟(jì)、環(huán)保性能等方面具有巨大的應(yīng)用價(jià)值而受到廣泛關(guān)注。磷脂酶是一類(lèi)廣泛存在于動(dòng)物、植物和微生物中，能夠特異性水解甘油磷脂的酶，根據(jù)磷脂酶與磷脂作用位點(diǎn)的不同，可將磷脂酶分為磷脂酶A₁（PLA₁）、磷脂酶A₂（PLA₂）、磷脂酶B（PLB）、磷脂酶C（PLC）和磷脂酶D（PLD）。目前，在植物油脫膠過(guò)程中，主要使用的是PLA₁、PLA₂、PLB和PLC。PLA₁和PLA₂能特異性水解磷脂的Sn-1或Sn-2位酯鍵，生成相應(yīng)的溶血磷脂；PLB能將Sn-1和Sn-2位的酯鍵都水解，生成相應(yīng)的甘油酰磷脂，溶血磷脂和甘油酰磷脂都具有很強(qiáng)的親水性，通過(guò)水合作用可以方便地除去。PLC能特異性水解磷脂Sn-3位上甘油磷酸酯鍵，生成相應(yīng)的甘二酯（DAG）和磷酯酸，而DAG作為中性油在后續(xù)的精煉過(guò)程中不會(huì)被去除，因而能有效提高油脂精煉后的得率。

研究表明，雖然單一的磷脂酶對(duì)毛油中磷脂具有很好的脫除效果，但反應(yīng)用時(shí)較長(zhǎng)，因而限制了其在油脂脫膠工業(yè)中的應(yīng)用。為此，人們研究利用多種磷脂酶對(duì)毛油進(jìn)行脫膠。例如，中國(guó)專(zhuān)利CN105038978公開(kāi)了將PLA和PLC一起用于酶反應(yīng)以去除油中存在的磷脂的方法，發(fā)現(xiàn)當(dāng)兩種酶一起使用時(shí)，酶反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)遠(yuǎn)快于任何一種酶單獨(dú)使用時(shí)的情況，即使未對(duì)至少一種酶的反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化時(shí)，該反應(yīng)仍比預(yù)期更為迅速，脫膠反應(yīng)可在小于一小時(shí)的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行，且脫膠反應(yīng)時(shí)間可快達(dá)約30 分鐘。雖然PLA和PLC共同脫膠可大大提高脫膠速度，但PLA和PLC會(huì)殘留在油中，且無(wú)法重復(fù)利用。在酶法脫膠中，為能重復(fù)利用磷脂酶，中國(guó)專(zhuān)利CN105132147公開(kāi)了一種用固定化PLC對(duì)大豆油脫膠的方法，同時(shí)解決了PLC的一次性使用和產(chǎn)物分離純化難等問(wèn)題，但還是運(yùn)用單一的磷脂酶，脫膠時(shí)間長(zhǎng)；中國(guó)專(zhuān)利CN104560387公開(kāi)了一種固定化PLA₁和固定化PLC 聯(lián)合應(yīng)用對(duì)大豆毛油進(jìn)行脫，使用6個(gè)批次后，固定化酶相對(duì)活力仍保持在80％左右，但該方法中PLA₁和PLC不是同時(shí)固定在同一載體上，實(shí)際上還是固定化PLA₁和固定化PLC先后單獨(dú)起脫膠作用，并沒(méi)有發(fā)揮PLA₁和PLC的協(xié)同作用；中國(guó)專(zhuān)利CN102776066公開(kāi)了一種用固定化PLA₂ 脫膠的方法，該固定化酶重復(fù)使用7 次后活力可以保持54%以上，同樣的是運(yùn)用單一的磷脂酶，脫膠時(shí)間長(zhǎng)。

因此，為提高毛油的酶法脫膠效率，減少酶在油中的殘留，如何重復(fù)運(yùn)用復(fù)合酶脫膠，是本領(lǐng)域研究的一個(gè)新方向。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種固定化復(fù)合磷脂酶酶法脫膠工藝，先將用于脫膠的PLA₁、PLC、脂肪酶和蛋白酶同時(shí)固定在同一大孔樹(shù)脂上，然后將同時(shí)固定有PLA₁、PLC、脂肪酶和蛋白酶的大孔樹(shù)脂用于油脂脫膠，PLA₁、PLC、脂肪酶和蛋白酶發(fā)揮協(xié)同作用對(duì)油脂脫膠，不僅可以重復(fù)運(yùn)用復(fù)合磷脂酶脫膠，而且油脂中沒(méi)有酶殘留，脫膠效率高，得油率高。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的一個(gè)技術(shù)方案是：提供一種固定化復(fù)合磷脂酶酶法脫膠工藝，包括以下步驟：

A、制備固定化復(fù)合磷脂酶；