[發明專利]階梯式定量檢測血漿中血清白蛋白及纖維蛋白原的方法

有效

• 申請號: 201610202919.8
• 申請日: 2016-04-01
• 公開（公告）號: CN105785039B
• 公開（公告）日: 2017-08-04
• 發明（設計）人: 董宇平;陳笛笛;李汪洋;董立超;佟斌;石建兵
• 申請（專利權）人: 北京理工大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京理工大學專利中心11120
• 代理人: 楊志兵,李愛英

技術領域

本發明涉及一種階梯式定量檢測血漿中血清白蛋白及纖維蛋白原的方法，具體涉及一種階梯式點亮型定量檢測血漿中血清白蛋白及纖維蛋白原的方法，屬于生物熒光標記領域。

背景技術

血清白蛋白作為一種人血漿內主要的蛋白質，占血漿蛋白質總量的50％。對于一個正常人來說，每天10-15克的血清白蛋白在肝臟內被合成，其中40％的血清白蛋白通過血液與間質的交換作用被釋放到血管中。血清白蛋白含有一條具有585個氨基酸殘基的多肽鏈、一個色氨酸殘基、一個半胱氨巰基自由基，在血漿中的半衰期為15-19天。它的二級結構由三個結構域組成，每個結構域含有兩個子域。三個二維結構域組成了一個心形，微小的pH值變化顯示出中心結構的靈活性。由于具有鍵合脂多糖、其它細菌的產物(磷脂壁酸、肽多糖)、活性氧、一氧化氮、其它活性氮及前列腺素等的能力，血清白蛋白在血液中主要功能是調節血液滲透壓、轉運內源生理代謝產物(如膽紅素、脂肪酸)及外源配體(如華法林、布洛芬)，以增強它們在血液中的溶解度，將它們運送到特定的組織或器官，并銷毀掉具有毒性的一部分配體。

纖維蛋白原作為血漿內一種主要的止血成分，在白細胞介素IL-6和IL-1β的刺激下產生于肝臟內的一種促炎性蛋白質，屬于功能性自我平衡分子。它經常扮演著急性時相蛋白的角色，其含量的增加反映了傷口的愈合、炎癥、感染。另外，纖維蛋白原與癌癥轉移和術后復發密切相關，它通過凝血酶轉變為不溶的纖維網狀結構，并結合血小板的聚集進行初始的和繼發性的止血。因此，纖維蛋白原的含量與臨床病理因素息息相關，反映了化學治療，并能預測胃癌、結腸癌、肝癌、宮頸癌、食道癌的術后復發。

血清白蛋白和纖維蛋白原共存于血漿中，對于維持血液滲透壓和動力學過程，并反映各種生理疾病有著極其重要的臨床意義，兩者缺一不可。目前，血清白蛋白已作為一種指標來評估各種疾病。例如最常見的Child-Pugh分級標準用來量化評估肝臟的損害程度，而血清白蛋白含量作為五項評估指標中極其重要的一項，含量越高表示損害越嚴重，嚴重時會導致肝腹水。但是現有檢測手段檢出血清白蛋白的含量可能受樣本溶血、脂血、膽紅素及血液中其它組分的干擾而不太精準，嚴重影響到對疾病的判斷。此時需要對血液進行繁瑣的預先分離提純，才能得到更高純度的血清白蛋白，然而分離過程所產生的損失會影響到血清白蛋白準確含量的確定。因此，研發一種新型的、簡單快速、免分離提純的精確定量檢測血清白蛋白的方法成為目前臨床醫學的迫切需要。

專利申請“一種檢測微量血清白蛋白的熒光試劑、制備方法及應用”(專利申請號：201410389582.7)中報道過用一種熒光試劑DP-TPPNa成功定量檢測血清里血清白蛋白的方法。成果已證明DP-TPPNa對血清白蛋白的特異性與快速響應性，而對其它多種蛋白質(如胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、卵清白蛋白、轉鐵蛋白等)以及氨基酸沒有響應，同時血清里其它組分對白蛋白的檢測無明顯干擾，能達到快速、定量檢測的目的。但是這一檢測的前提是針對血清。而血清的獲得需要血液通過一系列復雜的化學提純，這在普通的醫院、小診所或醫療器械匱乏的條件下是無法完成的，沒法真正達到簡單的、免除分離提純的檢測目的。另外，血清與血漿的主要區別是血清不含有纖維蛋白原，而纖維蛋白原作為止血蛋白在血漿中具有不可替代的作用，通過熒光試劑在血漿中原位精確檢測血清白蛋白含量的同時，研究血清白蛋白與纖維蛋白原的相互作用是目前文獻沒有報道過的。(Arroyo,V.；Garcia-Martinez,R.；Salvatella,X.J.Hepatol.,2014,61,396-407.Arques,S.；Ambrosi,P.J.Car.Fail.,2011,17,451-458.Ha,C.E.；Bhagavan,N.V.Biochim.Biophys.Acta,2013,1830,5486-5493.Shao,Z.X.；Zhao,Y.；Feng,L.M.；Feng,G.F.；Zhang,J.W.；Zhang,J.Dis.Markers,2015,468596.Matsuda,S.；Takeuchi,H.；Fukuda,K.；Nakamura,R.；Takahashi,T.；Wada,N.；Kawakubo,H.；Saikawa,Y.；Omori,T.；Kitagawa,Y.Dis.Esophagus,2013,27,654-661.)。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種階梯式定量檢測血漿中血清白蛋白及纖維蛋白原的方法，所述方法簡單易操作，可以定量檢測血漿樣本中血清白蛋白和纖維蛋白原的濃度。

本發明的目的由以下技術方案實現：