[發明專利]一種痰熱清膠囊指紋圖譜的建立方法及其指紋圖譜

有效

• 申請號: 201610192503.2
• 申請日: 2016-03-30
• 公開（公告）號: CN105891353B
• 公開（公告）日: 2018-01-05
• 發明（設計）人: 徐英;劉紹勇;薛東升;鐘蘋蘋;張小利
• 申請（專利權）人: 上海凱寶藥業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司31213
• 代理人: 張寧展

技術領域

本發明涉及藥物分析檢測技術領域，尤其涉及一種痰熱清膠囊指紋圖譜的建立方法及其指紋圖譜。

背景技術

痰熱清膠囊由黃芩(君藥)、熊膽粉(臣藥)、山羊角(臣藥)、金銀花(佐藥)、連翹(使藥)制成，全方五味中藥互相配伍，具有疏風清熱、化痰解毒之功效，主要用于風溫肺熱病屬風熱襲肺證，癥見發熱、惡風、咳嗽、咯痰，或咽痛、流涕、口干等。

痰熱清膠囊現有質量標準中僅采用薄層色譜法，以熊去氧膽酸、鵝去氧膽酸、丙氨酸、苯丙氨酸、綠原酸作為對照品，以金銀花、連翹作為對照藥材，分別進行定性鑒別，同時采用高效液相色譜法對痰熱清膠囊中黃芩苷和熊去氧膽酸兩個成分進行定性鑒別和含量測定，質控指標成分較少，無法全面表征中藥復方制劑的物質基礎以及化學成分群的整體性和復雜性，因此，有必要建立痰熱清膠囊的標準指紋圖譜，從而較全面有效地控制痰熱清膠囊的的內在質量。

發明內容

本發明的目的是提供一種痰熱清膠囊指紋圖譜的建立方法，該方法操作簡便、結果穩定、重現性好、精密度高。

本發明的另一個目的是提供一種采用建立方法得到的痰熱清膠囊指紋圖譜。該指紋圖譜能夠更全面表征痰熱清膠囊的物質基礎以及化學成分群的整體性和復雜性。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的。

本發明提供一種痰熱清膠囊指紋圖譜的建立方法，所述痰熱清膠囊由黃芩、熊膽粉、山羊角、金銀花、連翹組成；通過采用高效液相色譜法檢測痰熱清膠囊成分建立痰熱清膠囊指紋圖譜，具體步驟如下：

1)制備對照品溶液：取新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、異連翹酯苷A、連翹酯苷A、野黃芩苷、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C、黃芩苷、連翹苷、千層紙素A-7-O-葡萄糖醛酸苷、白楊素-7-O-葡萄糖醛酸苷、漢黃芩苷和黃芩素，加甲醇制成各個對照品濃度為100μg/mL的混標溶液，作為對照品溶液，對照品溶液中每個對照品的濃度均為100μg/ml；

2)制備供試品溶液：取痰熱清膠囊內容物10mg，加70％甲醇1mL，超聲10min，離心，取上清溶液，經0.22μm微孔濾膜濾過，取續濾液，作為供試品溶液；

3)制作痰熱清膠囊指紋圖譜：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液注入高效液相色譜儀，根據以下色譜條件進行測定，記錄90分鐘的色譜圖，得到指紋圖譜；其中：所述色譜條件為：

采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱；柱溫為30℃；檢測波長為280nm；以乙腈為A相，0.2％甲酸水溶液為B相組成流動相，采用梯度洗脫方式，其洗脫時間、流動相體積和流速分別為：

0-10min,A相：10-12％、B相：90-88％，流速為1.0mL/min；

10-15min,A相：12-12％、B相：88-88％，流速為1.0mL/min；

15-20min,A相：12-19％、B相：88-81％,流速為1.0mL/min；

20-38min,A相：19-20％、B相：81-80％,流速為1.0mL/min；

38-40min,A相：20-30％、B相：80-70％,流速為1.0-0.8mL/min；

40-60min,A相：30-30％、B相：70-70％,流速為0.8mL/min；

60-65min,A相：30-90％、B相：70-10％,流速為0.8-1.0mL/min；

65-75min,A相：90-90％、B相：10-10％,流速為1.0mL/min；

75-80min,A相：90-10％、B相：10-90％,流速為1.0mL/min；

80-90min,A相：10-10％、B相：90-90％,流速為1.0mL/min。

上述表述，洗脫時間為38-40min時，流速由1.0ml/min變為0.8ml/min。洗脫時間為60-65min時，流速由0.8ml/min變為1.0ml/min。

本發明還提供一種上述的痰熱清膠囊指紋圖譜的建立方法得到的指紋圖譜，所述建立方法得到的指紋圖譜中共有16個特征峰，其中10號峰為對照品異綠原酸C，各峰以10號峰為參照峰的相對保留時間和相對峰面積如下：

相對保留時間：