[發(fā)明專利]提高豬偽狂犬病毒體外感染效率的細(xì)胞親和劑及使用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610186543.6
• 申請日: 2016-03-29
• 公開（公告）號(hào): CN105624123A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馮曉聲;王偉;王貴平;趙金旺;劉宗秀
• 申請（專利權(quán)）人: 四川海林格生物制藥有限公司
• 主分類號(hào): C12N7/00
• 分類號(hào): C12N7/00
• 代理公司: 成都行之專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51220
• 代理人: 廖慧敏

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種細(xì)胞親和劑，具體涉及一種提高豬偽狂犬病毒體外感染效率的細(xì) 胞親和劑，并提供了該試劑的使用方法。

背景技術(shù)

豬偽狂犬病毒屬于豬皰疹病毒屬，在全世界廣泛分布。目前，各個(gè)研究機(jī)構(gòu)對經(jīng)典 毒株和臨床分離的豬偽狂犬病毒進(jìn)行了體外細(xì)胞感染，并已研制出相關(guān)疫苗進(jìn)入商品化銷 售。

國內(nèi)外有多篇文獻(xiàn)報(bào)道指出，豬偽狂犬經(jīng)典株與臨床分離到的豬偽狂犬病毒可以 用多種細(xì)胞進(jìn)行體外感染，如VERO細(xì)胞、ST細(xì)胞等，實(shí)驗(yàn)室病毒培養(yǎng)滴度一般在10⁷TCID₅₀， 但對于疫苗生產(chǎn)企業(yè)來講，病毒的滴度越高，單位時(shí)間內(nèi)生產(chǎn)病毒的效率就越高，生產(chǎn)成本 也就越低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：對于疫苗生產(chǎn)企業(yè)而言，豬偽狂犬病毒的滴度較 低、生產(chǎn)成本較高；目的在于提供一種提高豬偽狂犬病毒體外感染效率的細(xì)胞親和劑，大大 提高工業(yè)化生產(chǎn)豬偽狂犬病毒效率，為生產(chǎn)企業(yè)提高豬偽狂犬疫苗質(zhì)量、降低生產(chǎn)成本提 供方法和依據(jù)。

本發(fā)明通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種提高豬偽狂犬病毒體外感染效率的細(xì)胞親和劑，包括復(fù)合酸與無機(jī)鹽；所述 復(fù)合酸包括蘋果酸、草酸、山梨酸和磷酸；所述無機(jī)鹽包括磷酸氫二鈉、氯化鉀、氯化鈉。

本發(fā)明通過優(yōu)化復(fù)合酸與無機(jī)鹽的組成物質(zhì)的優(yōu)選配合，有效改變豬偽狂犬病毒 與細(xì)胞間的微環(huán)境，增加病毒與細(xì)胞接觸親和度，從而增加病毒對細(xì)胞的感染率，進(jìn)而有效 增加豬偽狂犬病毒的滴度，降低生產(chǎn)成本。

上述提高豬偽狂犬病毒體外感染效率的細(xì)胞親和劑的使用方法，包括：

首先，將蘋果酸、草酸、山梨酸、磷酸、磷酸氫二鈉、氯化鉀和氯化鈉混合后制成細(xì) 胞親和劑；

其次，將細(xì)胞親和劑加入具有細(xì)胞的培養(yǎng)液中混合均勻后靜置1～30min，該培養(yǎng) 液中細(xì)胞親和劑的終濃度為0.01％～1％；

最后，將豬偽狂犬病毒加入到具有細(xì)胞親和劑的培養(yǎng)液中，混合均勻后培育即可。

本發(fā)明通過優(yōu)化細(xì)胞親和劑的使用量，不僅僅能有效增加豬偽狂犬病毒的滴度， 而且還能有效減少培育時(shí)間，效果對比結(jié)果如表2所示，通過表2可知，細(xì)胞親和劑的使用量 的優(yōu)化使偽狂犬病毒的滴度增強(qiáng)10倍甚至以上，且培育時(shí)間至少要節(jié)省四分之一，效果更 加顯著。

優(yōu)選地，所述蘋果酸為1～10份，草酸為1～12份，山梨酸為1～10份，磷酸為0.1～1 份；所述磷酸氫二鈉為1～16份，氯化鉀為6～60份，氯化鈉為1～9份。

優(yōu)選地，所述蘋果酸為1～10份，草酸為1.2～12份，山梨酸為1～10份，磷酸為0.1 ～1份；所述磷酸氫二鈉為5～7份，氯化鉀為6～10份，氯化鈉為3～8份。

通過采用上述優(yōu)選組成和配比的細(xì)胞親和劑，并將其使用到病毒生產(chǎn)后，不僅僅 使病毒滴度從原先的10^7.0TCID₅₀每毫升增加至10^9.2TCID₅₀每毫升，病毒滴度比原先提高近 100倍。

而且病毒感染細(xì)胞后，通常至少需要48h以上才能達(dá)到細(xì)胞病變脫落的目的，而加 入本發(fā)明優(yōu)化組分和配比的細(xì)胞親和劑后，僅僅只需要不到36h即可使細(xì)胞病變脫落，細(xì)胞 病變速度顯著加快，節(jié)省培育時(shí)間。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下的優(yōu)點(diǎn)和有益效果：

1、本發(fā)明通過優(yōu)化復(fù)合酸和無機(jī)鹽的組成物質(zhì)，有效改變豬偽狂犬病毒與細(xì)胞間 的微環(huán)境，增加病毒與細(xì)胞接觸親和度，從而增加病毒對細(xì)胞的感染率，進(jìn)而有效增加豬偽 狂犬病毒的滴度，降低生產(chǎn)成本；

2、本發(fā)明通過采用上述組成和配比的細(xì)胞親和劑，并將其使用到病毒生產(chǎn)后，不 僅僅使病毒滴度比原先不使用細(xì)胞親和劑時(shí)提高近100倍，而且還能使細(xì)胞病變速度顯著 加快，從原先的48h縮短到36h，顯著節(jié)省培育時(shí)間。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，下面結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明作 進(jìn)一步的詳細(xì)說明，本發(fā)明的示意性實(shí)施方式及其說明僅用于解釋本發(fā)明，并不作為對本 發(fā)明的限定。

實(shí)施例

本發(fā)明中提高豬偽狂犬病毒體外感染效率的細(xì)胞親和劑，具體組成成份如表1所 示。

表1