[發明專利]一種結核分枝桿菌單克隆抗體制備方法在審
| 申請號： | 201610178594.4 | 申請日： | 2016-03-20 |
| 公開（公告）號： | CN105732808A | 公開（公告）日： | 2016-07-06 |
| 發明（設計）人： | 張福華 | 申請（專利權）人： | 張福華 |
| 主分類號： | C07K16/12 | 分類號： | C07K16/12 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 264001*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 結核 分枝桿菌 單克隆抗體 制備 方法 | ||
1.一種結核分枝桿菌單克隆抗體制備方法，其特征在于包括以下步驟：
1)取人型結核分枝桿菌菌液作為抗原，與弗氏完全佐劑乳化后皮下注射小鼠，再于2周后、4周后以相同方法各免疫1次，6周后以相同劑量抗原腹腔注射小鼠；
2)3天后，取上述小鼠的脾臟細胞與骨髓瘤細胞按5∶1的細胞量比混合在一支融合管中，1000rpm離心10min，混勻，在37℃水浴中45s內加入1mLPEG到融合管中，混勻，而后在90s內滴加30mL的DMEM培養基，37℃靜止10min，而后1000rpm離心10min；棄上清，用60mLHAT培養基懸浮沉淀細胞，再加入腹腔巨噬細胞，置37℃5％CO2培養箱內培養；
3)利用間接ELISA檢測的方法，對步驟2)上清液中的抗體進行檢測，篩選出抗體陽性雜交瘤細胞；
4)取小鼠，以0.5mL/只的劑量腹腔注射滅菌液體石蠟，1周后以1×106CFU/只的劑量對小鼠腹腔注射步驟3)得到的雜交瘤細胞，而后從小鼠腹腔采集腹水，離心取上清，即得到結核分枝桿菌單克隆抗體。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟2)中所述的DMEM培養基是不完全DMEM培養基。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟2)中置37℃5％CO2培養箱內培養5d后用新鮮的HAT培養基換出一半培養基，10d后用預熱的HT培養基換出HAT培養基。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟3)中用免疫小鼠血清作為陽性對照，用非免疫小鼠血清作為陰性對照。
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟3)篩選出抗體陽性雜交瘤細胞后，先制備其亞克隆細胞株，再利用所述亞克隆細胞株執行步驟4)。
6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于所述離心的操作條件是2500rpm離心10min。
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