[發明專利]基于表達HBsAg和HBcAg的熱失活全重組漢遜酵母細胞的乙肝治療疫苗

有效

• 申請號: 201610176389.4
• 申請日: 2016-03-25
• 公開（公告）號: CN105727279B
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發明（設計）人: 汪和睦;楊珺;王昌華
• 申請（專利權）人: 汪和睦
• 主分類號: A61K39/29
• 分類號: A61K39/29;A61K39/39;A61P31/20;C12N1/19;C12R1/78
• 代理公司: 天津翰林知識產權代理事務所(普通合伙) 12210
• 代理人: 陳松

基于表達HBsAg和HBcAg的熱失活全重組漢遜酵母細胞的乙肝治療疫苗，以重組漢遜酵母胞內表達的HBsAgVLP和和HBcAgVLP為抗原，重組漢遜酵母表達的HBsAg的氨基酸序列中共含有19個CTL表位。重組漢遜酵母表達的HBcAg的氨基酸序列中共含有19個CTL表位，以熱失活全重組漢遜酵母細胞為佐劑。熱失活全重組漢遜酵母細胞為最主要專職抗原遞呈細胞(DC)Dectin?1受體的高效激動劑。HBV特異性CTL細胞，靶向感染HBV的肝細胞釋放IFN?γ：第一步非肝細胞損傷地減少其90％以上cccDNA分子池，第二步提高了過程中損傷受HBV感染的肝細胞，并觸發HBV免疫逆轉。

技術領域

本發明屬基因工程領域,涉及疫苗為熱失活全重組漢遜酵母細胞表達HBsAg和HBcAg治療乙肝疫苗。

背景技術

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是一個嚴重的公共衛生問題。據世界衛生組織(World Health Oganization,WHO)報道,全球60億人口中，約20億人曾感染過HBV，其中3.5億人為慢性HBV感染，每年約有100萬人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原發性肝細胞癌(肝癌)。全球肝癌患者中，75％以上是由HBV所致。我國屬HBV感染地方性流行區。我國衛生部于1992年將乙型肝炎疫苗納入計劃免疫管理。2001年12月國務院正式批準將乙型肝炎疫苗納入兒童計劃免疫,要求各省市自治區從2002年起,除收取少量手續費外,給所有新生兒免費接種乙型肝炎疫苗。按照2005年3月制訂的計劃免疫條例,自2005年6月1日起,所有新生兒乙型肝炎疫苗免疫完全免費。經過近15年的努力,我國一般人群,尤其是15歲以下兒童,乙型肝炎病毒感染率明顯下降。據2006年全國乙型肝炎血清流行病學調查表明,全人群乙型肝炎表面抗原(HBsAg)攜帶率己由1992年9.75％降至7.18％,5歲以下兒童的乙型肝炎表面抗原攜帶率已由原來9.67％降至0.96％。據此推算,我國現有的慢性HBV感染者約9300萬人,其中慢性乙型肝炎患者約2000萬例。每年因HBV導致的肝硬化和肝癌死亡30余萬例,新發乙型肝炎病例50萬-100萬例。因此,本病是我國當前和今后相當長時期內危害人民健康、阻礙社會發展、影響社會穩定的重要因素,是一個嚴重的公共衛生問題,也是我國在建立以人為本的和諧社會過程中,需要優先解決的一個重大健康問題。我國人群HBV感染的流行率高,給國家帶來了沉重的經濟負擔。據調查.我國每年因慢性乙肝(包括肝硬化、肝癌)的直接和間接醫療費用約6800億元。乙肝疫苗免疫預防與治療是降低疾病負擔最有效的方法。

基因重組技術是現代生物技術的核心技術；也是規模化生產乙肝疫苗主要組份——病毒樣顆粒乙肝表面抗原(HBsAg VLP)的唯一技術。本專利權人從1995年開始從事漢遜酵母重組乙肝疫苗研發工作。1998-2002年在大連高新生物制藥有限公司，主持開發的漢遜酵母重組HBsAg adw2乙肝疫苗，HBsAg VLP抗原純品(原液)產率為40mg/升；于2002年起經國家審批上市。2003-2006年本人為北京天壇生物制品股份有限公司協議開發的重組漢遜酵母HBsAg-adr2乙型肝炎疫苗。其HBsAg VLP抗原純品(原液)產率為85mg/升以上；已于2015年申報國家新藥審評，以該疫苗為基礎申請的中國專利公開號為CN104232661A。

根據現有技術查明的乙型肝炎發病機制如下：人感染HBV后,一般可分為免疫耐受期、免疫清除期和非活動或低(非)復制期。免疫耐受期的特點是HBV復制活躍,血清HBsAg和HBeAg陽性,HBV DNA滴度較高(＞10⁵拷貝/ml),血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)水平正常,肝組織學無明顯異常。免疫清除期表現為血清HBV DNA滴度＞10⁵拷貝/ml,但一般低于免疫耐受期,天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)持續或間歇升高,肝組織學有壞死炎癥等表現。非活動或低(非)復制期表現為HBeAg陰性,抗-HBe陽性,HBV DNA檢測不到(PCR)法或低于檢測下限,水平正常,肝組織學無明顯炎癥。但在青少年和成人期感染HBV,一般無免疫耐受期,一開始即為免疫清除期,表現為急性乙型肝炎,其中僅5％-10％發展成慢性。但其確切的發病機制仍不了解。