[發明專利]鴨坦布蘇病毒滅活疫苗的制備及使用方法

在審

• 申請號: 201610164617.6
• 申請日: 2016-03-22
• 公開（公告）號: CN105688203A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發明（設計）人: 魏思遠;趙光偉
• 申請（專利權）人: 重慶三杰眾鑫生物工程有限公司
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61P31/14
• 代理公司: 重慶百潤洪知識產權代理有限公司 50219
• 代理人: 高姜

技術領域

本發明涉及一種鴨坦布蘇病毒滅活疫苗的制備及使用方法，主要涉及疫苗 領域。

背景技術

2010年以來，國內部分地區鴨流行一種以臨床癥狀為腳麻痹、采食量下降、 拉黃綠色稀便、產蛋驟降和神經癥狀，剖檢癥狀為心肌壞死、肝臟萎縮、脾臟 腫大出血、腸道輕微出血和出血性卵巢炎等為特征的疾病，病原鑒定為鴨坦布 蘇病毒(臨床通稱為黃病毒)，屬于黃病毒科黃病毒屬蚊媒病毒類恩塔亞病毒群， 是單股正鏈RNA病毒。該病毒對各種品系的鴨均致病，雛鴨最早發病日齡為7 日齡、20～40日齡及產蛋期高發，該病用常規抗病毒及抗菌治療療效不佳，死 淘率5～15％，繼發細菌感染時死淘率更高，恢復采食量需15天以上，商品鴨、 產蛋鴨愈后發育不良及產蛋率恢復差，該病目前無疫苗用于預防，對鴨養殖業 造成巨大經濟損失。

發明內容

針對以上現有技術的不足，本發明提出一種預防鴨坦布蘇病毒的鴨坦布蘇 病毒滅活疫苗的制備及使用方法。

為達到上述目的，本發明的技術方案是：包括種毒、抗原的制備、抗原的 鑒定、疫苗的制備和疫苗的檢驗，

第一步種毒：鴨坦布蘇病毒從26齡發病雛鴨中分離，鑒定，經易感鴨胚傳 代至第9代獲得；

第二步抗原的制備：將獲得的鴨坦布蘇病毒種毒用生理鹽水10000倍稀釋， 經尿囊腔接種11日齡易感鴨胚，0.1ml/胚，收集接種48～120小時死亡鴨 胚尿囊液，無菌檢驗合格，即為抗原，于-40℃保存；

在第三步對病毒含量、純凈性、特異性免疫原性進行鑒定，其中病毒含量 的鑒定中：抗原用生理鹽水10倍系列稀釋，取10^-4、10^-5、10^-6和10^-74個 稀釋度接種9日齡易感鴨胚，每個稀釋度各接種5枚，0.1ml/胚，用蠟封孔， 于37.5℃靜置孵化，24小時以前死亡的鴨胚棄去不計，收集24～168小時 死亡鴨胚，按Reed-Muench法計算病毒含量為10^-6.50ELD₅₀/0.1ml。

進一步，疫苗的制備：滅活抗原加入轉移因子和鴨白細胞介素2，使轉移因 子終濃度為4mg/ml，鴨白細胞介素2終濃度為5μg/ml，滅活前的鴨坦布 蘇病毒含量大于等于10^-6.0ELD₅₀/0.1ml，分裝，2-8℃保存，即為鴨坦布蘇病 毒轉移因子-白細胞介素2佐劑滅活疫苗。

本發明的有益效果：本發明制備鴨坦布蘇病毒轉移因子-白細胞介素2佐劑 滅活疫苗，8日齡以內雛鴨接種0.3～0.5ml/只，商品蛋鴨和種鴨在開產前15 日加強免疫1.0ml/只，整個飼養周期的預防保護率＞93％，零星發病的鴨子按常 規治療方法，治愈率顯著提高、康復期縮短5-7天。鴨坦布蘇病毒轉移因子-白 細胞介素2佐劑滅活疫苗為臨床預防鴨坦布蘇病毒病提供了有效手段。

具體實施方式

實施例

第一步種毒肉鴨養殖場26日齡發病雛鴨中分離得到鴨坦布蘇病毒，鑒定， 經易感鴨胚傳代至第9代獲得。

第二步抗原制備鴨坦布蘇病毒種毒用生理鹽水10000倍稀釋，經尿囊腔 接種11日齡易感鴨胚，0.1ml/胚，收集接種48～120小時死亡鴨胚尿囊液，無 菌檢驗合格，即為抗原，于-40℃保存。同時取樣用于鑒定。

第三步抗原鑒定

1病毒含量

抗原用生理鹽水10倍系列稀釋，取10^-4、10^-5、10^-6和10^-74個稀釋度接種 9日齡易感鴨胚，每個稀釋度各接種5枚，0.1ml/胚，用蠟封孔，于37.5℃靜置 孵化，24小時以前死亡的鴨胚棄去不計，收集24～168小時死亡鴨胚，按Reed- Muench法計算病毒含量為10^-6.50ELD₅₀/0.1ml。

2純凈性

抗原按照現行《中華人民共和國獸藥典》進行細菌、支原體和外源病毒檢 驗合格。

3特異性