[發明專利]一種裸鼴鼠少突膠質前體細胞培養方法

有效

• 申請號: 201610164348.3
• 申請日: 2016-03-22
• 公開（公告）號: CN105695409B
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發明（設計）人: 崔淑芳;楊文靜;孫偉;湯球
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: C12N5/079
• 分類號: C12N5/079
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 趙青

本發明涉及細胞生物學技術領域，特別涉及一種裸鼴鼠少突膠質前體細胞的分離純化和培養方法。本發明綜合使用多種培養基從裸鼴鼠胎鼠大腦皮層分離并純化培養少突膠質前體細胞，摸索出了適于變溫的嚙齒類哺乳動物裸鼴鼠少突膠質前體細胞的合理培養方法。本發明方法能夠簡便、高效、經濟的獲得大量功能活性正常的裸鼴鼠少突膠質前體細胞，低氧條件下的培養能夠保證這種細胞在離體環境中依然能夠保持在體狀態下的生物學特性，從而便于直接在純凈的體外細胞培養模型中進一步研究裸鼴鼠少突膠質前體細胞的特殊生理功能，從而為探索其中的生物學機制并應用于臨床相關領域提供重要的理論依據。

技術領域：

本發明涉及細胞生物學技術領域，具體涉及一種細胞的分離純化及培養方法，特別涉及一種裸鼴鼠少突膠質前體細胞的分離純化和培養方法。

背景技術：

少突膠質細胞(Oligodendrocyte)是中樞神經系統的成髓鞘細胞，其包繞有髓神經元軸突形成的髓鞘結構對神經元有營養、支持和保護作用，并且髓鞘的存在是神經元軸突動作電位高效傳導的結構基礎，能夠保證神經元之間信息傳遞的速率。少突膠質細胞是由少突膠質前體細胞分化而來，在病理情況下，少突膠質前體細胞可以受到微環境的刺激而再次啟動分化。在中風、腦白質營養不良以及新生兒缺血缺氧性腦病等多種與腦缺血缺氧相關的疾病中一般會伴隨有髓鞘的損傷(Billiards SS,Haynes RL,Folkerth RD,Borenstein NS,Trachtenberg FL,Rowitch DH,Ligon KL,Volpe JJ,KinneyHC.2008.Myelin abnormalities without oligodendrocyte loss in periventricularleukomalacia.Brain Pathol 18:153–163.)。

裸鼴鼠是一種變溫哺乳動物，在氧氣濃度僅有6％左右的不通風洞穴中能夠保持腦結構和功能的完整無損并進行正常的生命活動，尤其是耗氧量較高的少突膠質細胞。因此，研究裸鼴鼠少突膠質細胞特殊的低氧耐受能力對于腦缺血缺氧性疾病中少突膠質細胞損傷的治療具有重要的指導意義。由于在體微環境非常復雜，無法在體直接觀察少突膠質細胞在低氧環境中的功能改變情況及其適應機制，并且在體的結果可能容易受到微環境中其他細胞組分和結構的影響。因此需要建立離體的裸鼴鼠少突膠質細胞模型以彌補在體觀察的缺陷。

而少突膠質細胞是由少突膠質前體細胞分化而來，雖然前者增殖能力較差，但是少突膠質前體細胞具有較強的分裂增殖能力，易于體外培養，并通過誘導其分化的方法得到少突膠質細胞。目前，研究人員已經摸索出誘導小鼠神經干細胞球分化為少突膠質前體細胞并進一步使其分化為少突膠質細胞，以及大鼠少突膠質前體細胞的培養方法(WenjingYang,Lin Xiao,Cui Li,Xiuyun Liu,Mingdong Liu,Qi Shao,Dan Wang,Aijun Huang andCheng He.TIP30 inhibits oligodendrocyte precursor cell differentiation viacytoplasmic sequestration of Olig1.Glia.2015；63(4):684-98.)。另外，中國專利CN200910251053.X，申請公布號為CN101735983A，公開了一種大鼠的少突膠質前體細胞的分離純化方法，包括以下步驟：①獲取混合細胞，混合細胞培養基由DMEM/F12培養基和體積分數為10％的胎牛血清組成；②培養混合細胞：混合神經細胞培養基由DMEM/F12培養基、體積分數為1％的N2添加劑和體積分數為15～20％的B104條件培養基組成；③消化分離少突膠質前體細胞；④純化少突膠質前體細胞：少突膠質前體細胞純化培養基由無糖DMEM培養基、濃度為5～10mmol/L的乳酸、體積分數為1％的N2添加劑和體積分數為15～20％的B104條件培養基組成。

但是現有技術中無論小鼠還是大鼠的少突膠質前體細胞分離純化和培養方法均不適用于裸鼴鼠，目前國內外文獻尚無有關裸鼴鼠少突膠質前體細胞分離純化和培養方法的相關報道。

發明內容：