[發(fā)明專利]一種處理生物載片樣品的裝置和方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610160797.0
• 申請日: 2016-03-21
• 公開（公告）號: CN105675369B
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭金燦;郭恩明
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門通靈生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/44
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 江裕強(qiáng)

本發(fā)明公開一種處理生物載片樣品的裝置和方法。裝置主要包括檢測組件、基臺(tái)、Z臂、Y臂、X臂、加樣針。本發(fā)明可根據(jù)檢測過程要求和檢測步驟自動(dòng)實(shí)現(xiàn)定時(shí)定量加樣，自動(dòng)控制加熱，自動(dòng)控制灌液和排液，實(shí)現(xiàn)檢測過程的全自動(dòng)化。本發(fā)明的載片標(biāo)本需要熱處理時(shí)，可以直接向安插槽灌注溶液并進(jìn)行加熱。在熱處理過程中，縫隙中的溶液即使產(chǎn)生揮發(fā)也會(huì)由于毛細(xì)作用能夠從載片組件底部的縫隙口吸入，得到自動(dòng)補(bǔ)充，熱處理充分而均勻，不產(chǎn)生干枯的現(xiàn)象，克服傳統(tǒng)的烘烤式加熱容易造成揮發(fā)和干片問題，保障加熱過程的可靠性和重復(fù)性。本發(fā)明可以提高生物載片標(biāo)本處理的可靠性、重復(fù)性和效率并實(shí)現(xiàn)全程的自動(dòng)化流程。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物樣品處理領(lǐng)域，特別是涉及一種處理生物載片樣品的裝置和方法。

背景技術(shù)

免疫組織化學(xué)是一種利用抗原與抗體特異性識(shí)別的特征進(jìn)行對病理標(biāo)本中腫瘤或病原體特征蛋白檢測的技術(shù)。這個(gè)技術(shù)不僅能夠檢測病原特征物質(zhì)的性質(zhì)和量，更因?yàn)槟軌蛟诒３植±斫M織原有形態(tài)以及在病灶原位上檢測，使之成為對腫瘤和其它一些疾病的鑒別、診斷以及指導(dǎo)臨床治療最為有效和普遍使用的方法之一。

免疫組織化學(xué)的實(shí)驗(yàn)操作步驟和原理是：1）通過外科手術(shù)獲取病理標(biāo)本，經(jīng)過福瑪琳固定，酒精脫水，石蠟包埋后，切成3-5微米厚度的組織切片，粘附在玻片（載片）上。2）經(jīng)過有機(jī)溶劑脫蠟、酒精清洗、水化后，再經(jīng)過高溫烹煮使組織上的特征物質(zhì)（比如腫瘤特征蛋白，或病原體蛋白）回復(fù)原有形狀。3）經(jīng)過使用特異性抗體（具有與特征蛋白特異性結(jié)合能力的一抗抗體）對特征蛋白的識(shí)別。4）經(jīng)過酶標(biāo)二抗（能夠與一抗特異性結(jié)合的二抗抗體）的孵育，確定特異性一抗的位置。5）使用酶底物顯色劑使酶標(biāo)二抗所存在的位置顯色出來。6）使用蘇木素把整個(gè)組織形態(tài)襯染出來以便于對組織形態(tài)的識(shí)別。7）經(jīng)過這樣系列的操作過程，使腫瘤特征蛋白或病原體蛋白所存在的位置和量通過顯色的位置和顏色的深淺顯示出來，達(dá)到檢測的目的。

免疫組織化學(xué)整個(gè)過程需要近三十個(gè)步驟，包括：a) 脫蠟、水化、清洗、高溫?zé)崽幚怼⒗鋮s、清洗、一抗孵育、清洗、二抗孵育、清洗、顯色、清洗、襯染、清洗、脫水、封片等步驟。每步之間還需要將載片瀝干、擦拭等。受醫(yī)院與醫(yī)院之間的技術(shù)水平和操作習(xí)慣差異，難以規(guī)范。提高標(biāo)本處理的效率和可靠性成為當(dāng)務(wù)之急，自動(dòng)化是提高標(biāo)本處理量、提高標(biāo)準(zhǔn)化的方向。

目前全世界市場上有近十家全自動(dòng)免疫組化染色儀。 其中，美國的溫塔那（Ventana）、德國的萊卡（leica）和丹麥的丹科（Dako）三家的儀器最為常用。但所有的儀器均存在以下幾個(gè)缺點(diǎn)，歸納為：慢（每輪程需要3-5小時(shí)），標(biāo)本處理量小（每輪最多只能處理16-60張載片標(biāo)本），重復(fù)性差。

所有儀器都把載片標(biāo)本平鋪安放，占據(jù)空間大，限制了儀器的容量，一般為16-60張之間。

試劑加樣從載片上方噴射，加樣位置誤差大，難以確保覆蓋整張載片，有的標(biāo)本沒有得到試劑的覆蓋而出現(xiàn)假陰性。

絕大部分標(biāo)本處理過程中需要熱處理，這是使抗原或病原體特征蛋白回復(fù)原有形狀所必須的步驟。加熱要求在80^oC 以上的溫度并維持5-40分鐘。常用的方法是高壓鍋烹煮、一般沸煮或熱液體溫浴等方法。然而，目前儀器上的加熱都是以烘烤式的形式進(jìn)行，試劑的揮發(fā)和氣泡的產(chǎn)生難以控制。本領(lǐng)域幾大產(chǎn)家，如溫塔那的儀器使用油膜覆蓋的方法（在加了試劑之后復(fù)加一層硅油），減少揮發(fā)。但是硅油覆蓋難以做到每張載片都得以均勻完全，并且需要后續(xù)的特殊清洗洗去硅油。萊卡的儀器使用塑料蓋薄片的方式蓋在試劑上防止揮發(fā)，但是因?yàn)檩d片標(biāo)本是平方的，加熱過程中氣泡積累在標(biāo)本和塑料蓋之間，引起加熱不均勻、因氣泡局部積聚所產(chǎn)生的局部干枯問題以及局部氣泡積聚所造成的后續(xù)清洗不完全引起的背景等問題。其它產(chǎn)家，如丹科、Biocare，Biogenex等采用更溫和的溫度（一般在90-97^oC）來防止沸騰造成的氣泡、揮發(fā)和干枯現(xiàn)象。這種方法卻延長了時(shí)間，也還是不能徹底解決氣泡和揮發(fā)的根本問題。