[發明專利]用于抗體藥物遞送的紅細胞膜包裹的抗體納米粒子及制備方法

有效

• 申請號: 201610148434.5
• 申請日: 2016-03-16
• 公開（公告）號: CN105769818B
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 王依婷;丁曉鈴;漢琳;孫磊;閆志強;朱建中;王鏡;俞磊
• 申請（專利權）人: 華東師范大學
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K47/46;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 上海藍迪專利商標事務所(普通合伙) 31215
• 代理人: 徐筱梅;張翔

本發明公開了一種用于抗體藥物遞送的天然紅細胞膜包裹抗體納米粒子及制備方法。本發明中的紅細胞膜提取自實驗鼠，在經過處理后去除了大部分內容物和無關蛋白，并用得到的紅細胞膜包裹抗體形成的蛋白納米粒子。這種方法適用于紅細胞膜包裹各種抗體形成的納米粒子，可以提高游離型抗體的穩定性、體內循環時間，并降低機體免疫清除率。

技術領域

本發明涉及抗體藥物和納米醫藥技術領域，具體地說是一種用于抗體藥物遞送的紅細胞膜包裹的抗體納米粒子及制備方法。

背景技術

與傳統小分子抗癌藥相比，由于具有高特異性和強親和力，抗體正日益成為最重要的抗癌藥物之一。與其相比，盡管小分子抗癌藥有一定的藥效，并目前在化療中仍然使用廣泛，但其仍存在非特異性毒性（因針對所有分化細胞）和治療窗小等缺點。另外，小分子抗癌藥的耐藥性也是其臨床使用中常出現的問題，這些缺點給化療病人帶來了很多痛苦。而抗體因其對非特異性細胞毒性低、人體免疫原性低、生物可降解和生物相容性好等優點，已經越來越受到重視。

隨著對不同類型癌細胞異常信號通路的研究進一步發展，腫瘤標志物中許多關鍵的調節因子也逐漸成為了分子靶向治療的靶點。但由于抗體難以穿透細胞膜進入細胞內部，導致目前發現的許多細胞內的有效靶點如TERT、磷酸酶 / 激酶轉錄因子等不能用抗體阻斷，很大程度上阻礙了針對細胞內部抗原的抗體的成藥性。游離抗體的體積過大影響了其穿透腫瘤的能力，高間隙壓阻止了大分子在腫瘤中的擴散，這些因素進一步影響了腫瘤細胞對抗體藥物的攝取，成為阻礙治療進展的關鍵問題之一。抗體作用的靶點分為細胞內和細胞外，人們通常將注意放到細胞外靶點上以獲得更高的抗體-抗原接觸機會，而對細胞內靶點的藥物研究少之又少。實際上，胞內靶點是一個巨大的資源，因為他們既有更高的特異性，在與抗體接觸后又有很高的殺傷率。但目前極少人嘗試以細胞內抗原為靶點探討抗體納米粒子的攝取和作用。

另一方面，抗體是一種不穩定的蛋白，其暴露在外部的結構很容易受外界環境影響而失活，因此許多抗體在靜脈注射后體內滯留時間短，這也阻礙了抗體藥物的發展和應用。為了增加抗體半衰期，人們做了很多努力。如PEG化已經成為增加循環時間的金標準，但同時也存在一些問題，如產物純度不夠、對修飾分子的選擇性高、可能增加藥物毒性、大分子PEG排出體外困難等等。對于如何增加抗體循環時間仍需要有更深入的研究。

再則，一定粒徑的外源性粒子在體內易被網狀內皮系統識別并清除，這在一定程度上大大減少了大分子藥物在體內的作用時間。粒子的粒徑、表面電荷等對于這一問題都有著很大的影響。而紅細胞膜身為體內內源性物質，由于其表面攜帶一些特定蛋白如CD47，可以幫助其逃脫網狀內皮系統的吞噬。我們可以利用紅細胞膜這一特點，給大分子藥物穿上“外衣”，以降低巨噬細胞吞噬，延長體內作用時間。

發明內容

本發明的目的在于提供一種納米粒子的制備方法，利用該方法可制備出抗體納米粒子，再用處理好的紅細胞膜包裹，以期得到一種紅細胞膜包裹的抗體納米粒子。

本發明的另一目的是提供一種納米粒子在藥物遞送中的應用，即針對抗腫瘤藥物的臨床應用限制，利用上述紅細胞膜包裹的抗體納米粒子，可提高抗體的療效和生物利用度，同時此納米粒子具有高癌細胞攝取率、低網狀內皮系統清除率，及明顯延長體內作用時間的特點。

實現本發明目的的具體技術方案是：

一種用于抗體藥物遞送的納米粒子，特點在于其蛋白核心為等電點沉淀制成的抗體納米粒子，外包裹紅細胞膜。

一種上述用于抗體藥物遞送的納米粒子的制備方法，該方法包括以下具體步驟：

1）制備紅細胞膜

完全麻醉SD大鼠后心臟取血，將血轉移至含肝素鈉的 EP 管中；全血離心,棄去上層清液，留下暗紅色沉淀，PBS 洗滌，離心機離心，再洗滌數次；棄去上層清液，留下沉淀，取PBS吹散，取0.2mM EDTA放入離心管混勻，充分溶血后，加入20*PBS，離心，再溶血離心數次；棄去上層清液，沉淀即為紅細胞膜；